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Beclin 1及其相关基因在电离辐射诱导的自噬性细胞死亡中的作用

专 业: 放射医学
关键词: Beclin 1 p53 自噬性死亡 电离辐射
分类号: R73
形 态: 共 64 页 约 41,920 个字 约 2.005 M内容
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内容摘要


Beclin 1基因在自噬性死亡、胚胎发育及维持体内内环境稳定非常重要,由于Beclin 1突变或调控失调导致自噬性死亡功能缺失,在人类肿瘤发生中起到了重要的作用。

本实验采用分析细胞学及分子生物学手段,主要研究了电离辐射对人类乳腺癌细胞(MCF7)中Beclin 1信号传导通路的影响及其分子机制。

实验表明,MCF7细胞中MAP-LC3蛋白弥漫分布,电离辐射后可以引起MAP-LC3蛋白呈点状或环状分布,提示发生自噬性死亡;MCF7细胞生长倍增时间为12.5 h;4、6、10 Gy和12 Gy照射后各剂量点细胞存活率均低于对照,4 Gy时细胞存活率开始下降,12 Gy达存活率最低值;2、4、6 Gy和8 Gy照射后Beclin 1、p53及p21基因均随剂量升高而增强;4 Gy照射后Beclin 1、p53及p21基因表达4 h、8 h持续升高,16 h达到最高峰,32 h表达回落。

将Beclin 1基因沉默,细胞生长倍增时间为20.968 h;4、6、10 Gy和12 Gy照射后各剂量点细胞存活率均低于对照,4 Gy、6 Gy时细胞存活率均呈下降趋势,10 Gy下降至最低值,12 Gy时存活率回升;2、4、6 ..……

全文目录


内容提要
英文缩略词
第一章 前言
1.1 自噬性死亡
1.1.1 概述
1.1.2 电离辐射与自噬性细胞死亡
1.2 BECLIN 1 基因 14-15
1.2.1 Beclin 1 基因的组成与定位 14
1.2.2 Beclin 1 基因的功能 14-15
1.3 BECLIN 1 基因与其他基因相互作用与调控 15-18
1.3.1 Beclin 1 与UVRAG 的相互依赖作用 15
1.3.2 Beclin 1 与bcl-2 的相互作用 15-16
1.3.3 Beclin 1 与mTOR 的关系 16
1.3.4 Beclin 1 基因与p53 基因 16-17
1.3.5 Beclin 1-PI3KⅢ 复合物与 PI3K-AKT-mTOR 复合物的关系 17-18
1.3.6 Beclin 1 基因与Barkor 的关系 18
1.4 BECLIN 1 基因在辐射诱导的自噬性细胞死亡中的作用 18-19
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 主要的试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 细胞培养
2.2.1 细胞株
2.2.2 细胞培养试剂的配制
2.3 细胞模型的构建
2.3.1 质粒
2.3.2 试剂准备
2.3.3 转染步骤
2.3.4 感染细胞
2.4 细胞样本的处理
2.4.1 试剂的配制
2.4.2 步骤
2.5 蛋白质的提取
2.5.1 试剂的配制
2.5.2 细胞总蛋白的提取
2.6 蛋白质浓度测定
2.6.1 试剂的配制
2.6.2 步骤
2.7 蛋白质免疫印迹法(WESTERN BLOT)
2.7.1 试剂的配制
2.7.2 凝胶的制备
2.7.3 SDS-PAGE 电泳
2.7.4 转膜及封闭
2.7.5 抗体的杂交
2.7.6 暗室暴光
2.8 照射条件
2.9 细胞生长倍增时间研究
2.10 MTT 法
2.10.1 试剂配制
2.10.2 步骤
2.11 免疫细胞化学
2.11.1 试剂配制
2.11.2 操作步骤
2.12 统计学处理
2.12.1 生长曲线采用Origin 软件处理
2.12.2 倍增时间的计算采用公式
2.12.3 辐射敏感性采用Excel 软件处理
2.12.4 Westere Blot 条带采用Quantity One 软件处理
第三章 实验结果
3.1 电离辐射对LC3 的影响
3.1.1 MCF7 PQN-GFP-LC3 构建
3.1.2 电离辐射对LC3 蛋白的影响
3.2 细胞模型建立及一般生物学指标检测
3.2.1 MCF7BeclinRi 细胞模型构建
3.2.2 细胞倍增时间检测
3.2.3 电离辐射后细胞存活率的变化
3.3 电离辐射后 Beclin、p53、p21 量效、时程变化比较分析
3.3.1 Beclin 1 基因在各细胞中量效表达变化
3.3.2 Beclin 1 基因在各细胞中时程表达变化
3.3.3 p53 基因在各细胞中量效表达变化
3.3.4 p53 基因在各细胞中时程表达变化
3.3.5 p21 基因在各细胞中量效表达变化
3.3.6 p21 基因在各细胞中时程表达变化
第四章 讨论
4.1 电离辐射引起MCF7 细胞发生自噬性死亡
4.2 Beclin 1 基因沉默对细胞一般生物学指标的影响
4.3 电离辐射对 Beclin 1、p53 及 p21 基因的影响
4.4 研究展望
第五章 结论
参考文献
中文摘要

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中图分类: > R73 > 医药、卫生 > 肿瘤学

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