优秀研究生学位论文题录展示

新型单胺氧化酶荧光探针的研究

专 业: 生物化工
关键词: 单胺氧化酶 荧光探针 香豆素 荧光检测 提取分离 新药物靶标
分类号: Q554.9  O657.34
形 态: 共 47 页 约 30,785 个字 约 1.473 M内容
阅 读: 全文阅读说明

内容摘要


单胺氧化酶(MAO)是一种膜结合线粒体酶,在多巴胺氧化代谢中起重要作用。

根据其对底物或抑制剂结合的特异性、细胞分布、免疫特异性等特性分为A和B两种形式。

它与人体的很多精神性疾病以及健康有着密切的关系,譬如帕金森症、阿尔之海默症、精神分裂症和攻击性行为及癌症等。

因此,MAO作为新药物的靶标越来越受到广泛的关注和研究。

目前有多种方法检测单胺氧化酶的活性:

分光光度法、放射性法、高效液相法以及荧光探针法等。

分光光度法、放射性法、高效液相法等都不适合高通量的筛选:

而荧光探针具有很高的灵敏度和专一性,并且样品不需要复杂的提纯,因此荧光探针法被广泛应用于生物医学和生物学。

本论文首先根据单胺氧化酶的反应机理成功设计和合成了一个探针:

4-甲基-7-(3-氨基丙基)-香豆素。

该探针并无荧光,但经与单胺氧化酶作用,3-氨基丙基转化为醛,接着发生消除反应后,生成了具有强烈荧光性能的4-甲基-7-羟基香豆素。

因此通过检测荧光的变化就可检测MAO的活性。

接着利用从人胎盘和牛肝中提取的MAOA和MAOB粗酶,系统的研究了探针的检测条件:

2 h,温度为37℃,硼酸缓冲液pH=8.4,最后对他们的动力学常数进行了测定。

结果为MAOA:

Km=16.04±0.05μmol\L,Vmax=0.72±0.01 nmol\min\mg; MAOB:

Km=12.25±0.05μmol\L,Vmax=2.57±0.02 nmol\min\mg。

最后,本论文对探针进行了简单的应用,包括酶提取和人血清的检测。

总之,本论文所设计的探针是非常高效和灵敏的,同时它对MAOA和MAOB有选择性..……

全文目录


文摘
英文文摘
第一章 文献综述
1.1单胺氧化酶简介
1.1.1单胺氧化酶的晶体结构
1.1.2单胺氧化酶的基因结构
1.1.3单胺氧化酶的生物功能
1.1.4单胺氧化酶的国内外研究现状
1.1.5单胺氧化酶的检测方法
1.2探针及其检测技术
1.2.1探针与标记
1.2.2.荧光探针分类
1.3课题思路
第二章 单胺氧化酶探针的合成
前言
2.1实验材料
2.1.1实验主要材料和试剂
2.1.2实验器皿和设备
2.1.3主要试剂配制
2.2实验方法
2.2.1探针的合成
2.3实验结果
2.3.1 4-甲基-7-羟基-香豆素的结构的鉴定
2.3.2 N-Boc-3-溴丙胺的合成
2.3.3 4-甲基-7-(3-氨基丙基)-香豆素的结构的鉴定
2.3本章小结
第三章 单胺氧化酶粗酶的提取及酶活测定
前言
3.1实验材料
3.1.1试剂及药品
3.1.2实验器皿和设备
3.1.3主要试剂配制
3.1.4单胺氧化酶的来源
3.2.实验方法
3.2.1酶的提纯的方法
3.2.2单胺氧化酶的酶活测定(紫外分光光度计法)
3.2.3探针对酶提取的条件的优化
3.3结果和讨论
3.3.1单胺氧化酶粗酶提取结果
3.3.2单胺氧化酶的酶活测定结果
3.3.3酶提取条件探针的应用
3.4本章小结
第四章 单胺氧化酶的检测
前言
4.1实验材料
4.1.1试剂及药品
4.1.2实验器皿和设备
4.1.3主要试剂配制
4.2实验方法
4.2.1酶活检测条件的优化
4.2.2酶活反应动力学常数的测定
4.3结果和讨论
4.3.1酶活检测条件的优化
4.3.2酶活反应动力学常数的测定
4.4本章小结
第五章 单胺氧化酶的探针的检测应用
前言
5.1实验材料
5.2实验方法
5.2.1人血清中MAO活性的检测
5.3实验结果与讨论
5.3.1人血清中MAO活性的检测
5.4本章小结
第六章 实验总结和展望
参考文献

相似论文

  1. 芳香酮还原酶产生菌红酵母AS2.2241的筛选及应用,52页,Q554.9
  2. 苹果酸脱氢酶包涵体的表达及复性研究,84页,Q554.9 TQ225.41 Q946.818.3
  3. 鸡腿菇(Coprinus comatus)漆酶的诱导及cDNA克隆,88页,Q554.9
  4. 固定化黄孢原毛平革菌生产木素过氧化物酶及其对染料脱色降解的研究,66页,Q554.6 TQ61
  5. 精氨酸脱亚氨基酶的分离及固定化,42页,Q554.4
  6. 木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的共固定化及在手性合成中的应用,88页,Q554 TQ033
  7. 黄孢原毛平革菌胞外过氧化物酶的生产、固定化及应用,73页,Q554.6
  8. 木素过氧化物酶的生产、固定化及其在染料降解中应用,73页,Q554.6 Q814.2
  9. 耐盐节杆菌的SOD诱导、纯化及性质研究,61页,Q554 Q936
  10. 蛋白质静电吸附平衡与动力学的研究,109页,O657.7 O629.73
  11. 新型色谱介质的制备及其性能表征,123页,O657.72 O614.411
  12. 鸡卵黄免疫球蛋白及卵磷脂的分离纯化,79页,O657.7 TS253.1
  13. 离子交换色谱复性重组人粒细胞集落刺激因子的研究,79页,O657.7
  14. 中药血竭指纹图谱的建立及对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究,57页,O657.7 Q55
  15. 可溶性淀粉及糊精在毛细管电泳药物手性分离中的应用,55页,O657.8
  16. 色素亲和色谱和流通色谱模型研究,76页,O657.7 O658.1
  17. 流通色谱介质的研制和生物大分子色谱分离,112页,O657.7
  18. 毛细管电泳手性拆分N-Fmoc保护氨基酸,76页,O657.8 O629.7
  19. 新型毛细管电动微分离材料和方法的研究,138页,O657.8
  20. 在毛细管电泳中应用移动反应界面法富集和检测大鼠血浆中的氧化苦参碱和苦参碱,63页,O657.8 Q503
中图分类: > Q554.9 > 生物科学 > 生物化学 > 酶 > 氧化还原酶
其他分类: > O657.34 > 数理科学和化学 > 化学 > 分析化学 > 仪器分析法(物理及物理化学分析法)

© 2012 book.hzu.edu.cn