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气单胞菌产几丁质酶的工艺条件优化和应用初探

专 业: 生物化工
关键词: 几丁质酶 气单胞菌 分批发酵 补料发酵
分类号: Q556
形 态: 共 69 页 约 45,195 个字 约 2.162 M内容
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内容摘要


几丁质酶(chitinase Ec.3.2.14)能够催化几丁质水解为几丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖,广泛存在于各种微生物、植物及动物细胞和组织中。

由于几丁质酶在生物防治和处理几丁质废物等方面具有巨大的应用潜力,因而受到广泛的重视。

本文对实验室保藏的几丁质酶产生菌Ch2进行了形态结构特征、生理生化特征的鉴定,并用Biolog进行分析,初步确定为气单胞菌属(Aeromonas sp.)菌株。

通过对Ch2菌株的生长曲线、生长条件的研究,初步了解菌株的生长特性。

进行了.Aeromonas sp.Ch2发酵工艺条件的优化,以提高其产酶活力。

经优化确定的较佳培养基组成为:

胶体几丁质0.5%,蛋白胨1.2%,尿素0.2%,MgSO4 0.05%,K2HPO4 0.03%,NaCl 0.5%;较佳培养条件为:

培养基初始pH为6.5-7.0,培养温度为28℃,接种量为6%,摇瓶装量为50 mL培养基\250 mL 三角瓶,180 r\min摇床培养3d。

按优化工艺进行发酵,菌体产几丁质酶的活性达到1.69 U\mL,比优化实验前提高了7.5倍。

进行了该菌3 L发酵罐产酶的研究,比较了分批发酵和补料发酵过程中发酵液中菌体生长规律, pH、还原糖和酶活力之间的关联情况。

补料发酵时,几丁质酶的活力在65h达到产酶高峰,达到1.802U\ml,产酶高峰比分批发酵提前7h,酶活力比分批发酵提高了5%。

粗酶液经硫酸铵盐析(60%饱和度,4℃)、亲和层析(以再生脱乙酰几丁质为介质)纯化后,样品经SDS-PAGE电泳只显示单一条带。

分别进行了产酶菌体和几丁质酶初步盐析粗品的抑菌试验,结果显示几丁质酶粗品的抑菌效果好。

同时考察了几丁质酶粗品对壳聚糖的降解效果,结果显示几丁质酶粗品对脱乙酰度低的壳聚糖降解效果较好..……

全文目录


文摘
英文文摘
第一章 文献综述
1.1几丁质的概述
1.1.1几丁质分布与制备
1.1.2几丁质化学结构
1.2几丁质酶及其应用研究
1.2.1几丁质、壳聚糖的生物降解机制
1.2.2几丁质酶的催化机制
1.2.3几丁质酶的研究现状
1.2.4微生物几丁质酶的性质和特点
1.2.5几丁质酶生物降解的应用
1.3本课题的研究意义
1.4研究内容与思路
第二章 产几丁质酶海洋细菌的鉴定
2.1前言
2.2材料
2.2.1菌种来源
2.2.2主要试剂配制
2.2.3培养基
2.2.4主要试剂
2.2.5主要仪器
2.3实验方法
2.3.1分离纯化
2.3.2 Ch2菌种鉴定
2.3.3 Ch2的生长特性
2.4结果与分析
2.4.1 Ch2菌菌种鉴定结果
2.4.2 Ch2菌的生长特性
2.5本章小结
第三章 Aeromonas sp.Ch2产几丁质酶的发酵工艺研究
3.1前言
3.2实验材料与方法
3.2.1材料
3.2.2实验方法
3.3结果和讨论
3.3.1氨基葡萄糖标准曲线
3.3.2产酶条件的研究
3.3.3均匀设计法培养基配方的优化
3.4本章小结
第四章 Aeromonas sp.Ch2产几丁质酶3L罐发酵研究
4.1前言
4.2实验材料与方法
4.2.1材料
4.2.2实验方法
4.3结果和讨论
4.3.1分批发酵研究
4.3.2补料发酵研究
4.4本章小结
第五章 Aeromonas sp.Ch2几丁质酶的分离纯化和应用研究
5.1前言
5.2材料与方法
5.2.1实验材料
5.2.2实验方法
5.3结果与讨论
5.3.1几丁质酶的纯化程序
5.3.2几丁质酶的抑菌实验
5.3.3几丁质酶对壳聚糖降解实验
5.4本章小结
第六章 结论与展望
6.1结论
6.2展望
参考文献

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中图分类: > Q556 > 生物科学 > 生物化学 > 酶 > 水解酶

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