优秀研究生学位论文题录展示

Ki67基因启动子克隆及其核心功能区域鉴定

专 业: 外科学
关键词: Ki67基因 启动子 肿瘤特异性 克隆 转录因子
分类号: R73
形 态: 共 77 页 约 50,435 个字 约 2.413 M内容
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内容摘要


目的: 克隆Ki67基因启动子并鉴定其核心功能区域的活性及肿瘤特异性。

方法: 以EcoR I酶过度酶切的肾癌Ketr-3细胞基因组DNA为模板,使用PCR的方法获取Ki67基因5侧翼序列,测序正确后插入pGL3-Basic载体。

使用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定其启动子活性及肿瘤特异性。

使用缺失分析法分别从Ki67基因5侧翼的5端和3端逐段缺失,克隆得到不同长度的截短片段,插入pGL3-Basic载体,使用双荧光素酶检测系统定位Ki67基因启动子核心功能区域,鉴定其启动子活性及肿瘤特异性。

结果: 克隆到的Ki67基因5侧翼序列与Genbank中记录完全一致,其启动子活性在Hela细胞、BIU-87细胞、Ketr-3细胞、A549细胞四种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter\enhancer活性的21.0%、31.1%、23.9%和7.2%;在人正常Huvec细胞内仅为0.5%。

自5端缺失的截短片段其活性表现为先升高后降低,在Hela细胞、BIU-87细胞、Ketr-3细胞、A549细胞内,-223~+771截短片段的活性达到峰值,分别为SV40 promoter\enhancer活性的18.2%、56.5%、44.1%和13.2%;自3端缺失的截短片段均表现出较缺失前更强的启动子活性,-223~+30截短片段的活性在Hela细胞、BIU-87细胞、Ketr-3细胞、A549细胞内分别为-223~+771截短片段活性的2.9倍、2.6倍、2.4倍、2.7倍,亦比hTERT启动子及Survivin启动子活性强。

结论: 首次克隆出Ki67基因启动子(-820~+771),其特点为富含GC,无TATA盒和CAAT盒;鉴定出-223~+30区域为启动子核心功能区域,该区域具有很强的启动子活性及一定的肿瘤特异性;-820~-427和+31~+771区域存在潜在的抑制性元件,对Ki67启动子有不同程度的抑制作用;转录起始点的有无对Ki67启动子的活性影响不大..……

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论文说明:缩略词表
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前言
材料与方法
1 材料
2方法
结果
讨论
结论
论文图片
参考文献
综述 细胞增殖相关抗原与泌尿系肿瘤的关系

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中图分类: > R73 > 医药、卫生 > 肿瘤学

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