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大鼠牙根发育模式相关基因的筛选及部分基因功能的研究

专 业: 口腔临床医学口腔内科学
关键词: 大鼠 牙根发育 差异表达基因 基因功能
分类号: R78  Q132  Q78
形 态: 共 120 页 约 78,600 个字 约 3.76 M内容
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内容摘要


本研究目的是利用大鼠下颌磨牙和切牙具有完全不同的牙根发育模式作为动物模型,对牙根发育相关的差异表达基因进行筛选并对部分差异基因的功能进行探讨,为牙根发育及牙根再生研究提供理论依据。

本课题采用组织学、免疫组织化学、改良消减杂交技术、Northern blot、Western blot、RT-PCR、Real-time PCR、细胞培养、基因转染和RNA干扰等方法,进行了实验研究。

通过组织学观察大鼠下颌第一磨牙和下颌切牙的发育时序,建立了大鼠牙根发育启动相关差异表达基因文库,为进一步筛选牙根发育模式相关基因奠定了基础。



采用特异的引物通过RT-PCR的方法进行差异基因NfiC的克隆,结果意外的发现在大鼠磨牙胚发育中至少存在3种NfiC基因选择性剪接体,并通过T-A克隆获得剪接体的克隆,为进一步研究NfiC基因在磨牙牙根发育中的作用提供了新思路。

针对Sel1L基因的RNA干扰载体,通过RT-PCR及Western Blot对转染前后的细胞进行对比检测,发现所构建的RNA干扰载体可以有效的抑制大鼠牙胚细胞中Sel1L基因的表达。

总结了Sel1L基因可能通过抑制Notch信号、促进TGFβ信号、抑制牙胚细胞的增殖、促进牙胚细胞的凋亡和分化,从而影响牙根发育模式的形成的结论..……

全文目录


缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
一.发育模式形成机制与牙齿发育机制研究进展
二.差异表达基因的筛选技术和RNA干扰在基因功能研究中的应用研究进展
参考文献
实验部分
第一部分 .大鼠上皮根鞘发育时序的组织学研究
1.材料和方法
2.结果
3.讨论
参考文献
第二部分 .大鼠牙根发育模式相关基因的克隆及筛选
实验1.大鼠牙根发育模式相关基因消减文库的建立
实验2.大鼠牙根发育模式相关基因消减文库的鉴定和筛选
参考文献
第三部分 .差异新基因Mrp1的组织表达研究、结构分析及原核表达载体构建
实验1.Mrp1基因组织表达谱研究及结构分析
实验2.大鼠Mrp1基因原核表达载体的构建
参考文献
第四部分 .差异基因NfiC在磨牙胚组织选择性剪接体的克隆
1材料和方法
2.结果
3.讨论
参考文献
第五部分 差异基因Sel1L在牙齿发育中表达及功能研究
实验1.Sel1L在牙胚发育及体外培养牙胚细胞中表达的研究
实验2.Sel1L基因RNAi载体的构建及转染牙胚细胞的研究
实验3.Sel1L干扰后牙胚细胞的增殖、凋亡检测及对Hes1、Smad4及DSPP表达的影响
参考文献
全文总结
展 望
附 图

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中图分类: > R78 > 医药、卫生 > 口腔科学
其他分类: > Q132 > 生物科学 > 普通生物学 > 生物形态学 > 普通胚胎学
其他分类: > Q78 > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)

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