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固定化酪氨酸酶的制备及部分性质研究

专 业: 生物化工
关键词: 固定化酶 酪氨酸酶 酶动力学 生物传感器 制备条件
分类号: Q814.2  TQ426.97
形 态: 共 53 页 约 34,715 个字 约 1.661 M内容
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内容摘要


本文以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对制备固定化酪氨酸酶的条件以及固定化酶的性质进行了研究,得到以下结论:1.试验结果表明:

固定化酪氨酸酶最佳条件是戊二醛的浓度为3%V/V,溶液pH=8.0,给酶量为105U/g载体。

2.通过对比酪氨酸酶固定前后的性质发现,固定化反应使酶最佳pH值降低,最佳温度升高。

固定化酶的耐热性和重复使用稳定性较溶液酶均得到较大的提高。

3.研究发现,当载体与戊二醛交联后,是否再经甲醛处理,对固定化酶的稳定性影响最大:

如果载体经甲醛处理完后,再与酶反应,得到的固定化酶显示出很高的使用稳定性,在25℃分别使用50次后,固定化酶的活力只下降了2.13%,而未经甲醛处理的载体得到的固定化酶在25℃下使用50次后,固定化酶的活力则下降了40.39%。

用甲醛处理后得到的固定化酶,固定化率达到66.2%,酶活力回收率为44.9%

4.通过对固定化酶的可见-紫外吸收光谱和SEM图谱分析发现,载体经过甲醛处理,能使载体上剩余氨基被遮蔽,避免氨基对反应中间物多巴醌的吸附,从而增大酶在催化底物时的传质阻力,导致酶催化反应速度逐渐下降。

5.对酶的动力学参数进行了测定,发现固定化酶的Km比溶液酶的Km增加了14%,即固定化反应使酶促反应的速度相应地有所下降。

6.通过研究以固定化酪氨酸酶修饰铂电极构成电流型生物传感器测定水中酚类物质的方法研究,发现在外加电压为-170mVvs.SCE,pH值为5.0的磷酸盐缓冲溶液中,在浓度为1.0×10-7~2.0×10-5mol/L的范围内,电极响应信号与苯酚的浓度有较好的线性关系,响应时间为60s。

通过本研究可以看出,壳聚糖分子结构中的氨基使酶易于固定,并且其来源丰富,机诫性能较好,化学性质稳定等特点决定了它可成为极具希望的固定酪氨酸酶的载体材料,为酪氨酸酶的应用开拓了广阔的前景..……

全文目录


文摘
英文文摘
1绪论
2文献综述
2.1酪氨酸酶简介
2.1.1酪氨酸酶的分布、性质与功能
2.1.2酪氨酸酶的应用研究进展
2.2固定化酶的研究进展
2.2.1固定化酶的研究意义
2.2.2固定化酶的应用
2.2.3酶固定化的载体
2.2.4固定化酶的性质
2.2.5固定化酪氨酸酶研究进展
2.3酶固定化载体-壳聚糖的研究进展
3实验材料与方法
3.1实验材料与设备
3.1.1实验设备
3.1.2实验试剂
3.2实验方法
3.2.1酶的分离方法
3.2.2酶活力测定方法
3.2.3酶的固定化方法
3.2.4pH的测定方法
3.2.5双倒数法求KIH
4实验内容
4.1壳聚糖固定酪氨酸酶的制备及性质研究
4.1.1丙酮粉的制备
4.1.2酪氨酸酶原液的制备
4.1.3固定化酶的制备:
4.1.4酶活力的测定
4.2甲醛处理对固定化酪氨酸酶稳定性影响的机理研究
4.2.1丙酮粉和酪氨酸酶原液的制备
4.2.2壳聚糖膜的制备
4.2.3壳聚糖膜吸收曲线的制备
4.2.4固定化酶的电镜扫描
4.3固定化酶的动力学研究
4.3.1丙酮粉和酪氨酸酶原液的制备
4.3.2固定化酶的制备:
4.3.3酶活力的测定
4.4固定化酪氨酸酶生物传感器测定水中酚类物质的的初步研究
4.4.1电极制作
4.4.2工作电位的确定
4.4.3定量分析
5结果与分析讨论
5.1酶的固定化条件的优化
5.1.1戊二醛浓度的优化
5.1.2固定化反应pH值对固定化酶活力的影响
5.1.3固定化给酶量对固定化酶活力的影响
5.2固定化酶的性质
5.2.1固定化酶的最佳反应pH值
5.2.2.固定化酶的最佳反应温度
5.2.3.固定化酶的稳定性
5.3甲醛处理对固定化稳定性影响的机理研究
3.3.1紫外可见吸收光谱比较
3.3.2 SEM分析
5.4固定化酶的动力学研究
5.5固定化酪氨酸酶生物传感器测定水中酚类物质的的初步研究
5.5.1工作电位的确定
5.5.2 pH值对电极响应的影响
5.3.3电极响应时间的确定
5.3.4线性区间和检测下限的确定
5.3.5准确度和精密度的分析
6结论
展望
参考文献
申明

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中图分类: > Q814.2 > 生物科学 > 生物工程学(生物技术) > 酶工程
其他分类: > TQ426.97 > 工业技术 > 化学工业 > 试剂与纯化学品的生产 > 催化剂(触媒)

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