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诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆及在大肠杆菌中的表达

专 业: 生物化工
关键词: 诺卡氏菌 酰胺酶基因 分子克隆 重组大肠杆菌
分类号: Q81  TQ426.6
形 态: 共 74 页 约 48,470 个字 约 2.319 M内容
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内容摘要


丙烯酰胺和丙烯酸是两种应用广泛的重要化工原料。

诺卡氏菌酰胺酶是一种重要的生物催化剂,它既是丙烯酰胺微生物法生产中导致副产物生成的关键酶,同时也是丙烯酸微生物法生产中负责产物合成的关键酶。

为了阻断丙烯酰胺生产中的副产物生成或强化丙烯酸生产中的产物合成,本研究重点对诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆和重组表达进行了研究。

1、在对大量已知红球菌和诺卡氏菌酰胺酶基因进行序列分析和比对的基础上,设计了三种酰胺酶基因的克隆策略,以野生诺卡氏菌基因组DNA为模板,利用PCR方法成功调取了诺卡氏菌酰胺酶基因基因文库登记号DQ342287。

进一步对该基因进行了多重序列比对和进化树分析、稳定性预测、稀有密码子和疏水性分析、胞内位置分析以及二级结构预测。

2、将获得的酰胺酶基因序列连接到pET质粒和pMAL-p2x质粒上,分别转化进E.coliBL21DE3和E.coliTBl中,构建了多株重组大肠杆菌。

在不同培养和诱导条件下对酰胺酶基因进行了诱导表达,在E.coliTB1/pMAL-Ami中获得了80U/L的酰胺酶酶活。

总之,诺卡氏菌酰胺酶基因的成功克隆和表达,为丙烯酸的微生物法生产奠定了基础,同时也使得彻底解决丙烯酰胺生产中的副产物生成问题成为可能,从而具有广泛的应用前景..……

全文目录


文摘
英文文摘
论文说明:符号说明
第一章 绪论
第二章 诺卡氏菌酰胺酶基因克隆与生物信息学分析
第三章 诺卡氏菌酰胺酶基因在重组大肠杆菌中的克隆表达
第四章 结论
参考文献
附录

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中图分类: > Q81 > 生物科学 > 生物工程学(生物技术)
其他分类: > TQ426.6 > 工业技术 > 化学工业 > 试剂与纯化学品的生产 > 催化剂(触媒)

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