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人Ⅰ型精氨酸酶基因的克隆及表达

专 业: 生物化工
关键词: Ⅰ型精氨酸酶 基因克隆 大肠杆菌 毕赤酵母 基因表达
分类号: Q55  Q78
形 态: 共 54 页 约 35,370 个字 约 1.692 M内容
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内容摘要


精氨酸酶是尿素循环中的一种酶,催化精氨酸水解产生鸟氨酸和尿素,在机体氮代谢方面起了重要作用。

精氨酸作为一种半必需氨基酸,仅为快速增长的组织,尤其是肿瘤组织所必需。

而精氨酸酶通过分解精氨酸对肿瘤细胞进行营养剥夺,对正常组织影响较小,因此是一种良好的抗肿瘤药物。

以人肝总RNA为模板,用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到人Ⅰ型精氨酸酶基因(hA Ⅰ)的cDNAf序列。

序列全长969bp,与Genebank中登录序列同源性大于99.7%。

将hA Ⅰ重组到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,构建重组质粒pPIC9K-hA Ⅰ,转化至毕赤酵母宿主菌SMD1168,得到基因工程菌SMD1168(pPIC9K-hA Ⅰ)。

0.5%甲醇诱导后,用酶活检测和SDS-PAGE的方式鉴定hA Ⅰ的表达。

甲醇诱导至120h为止,上清中始终未检测到外源蛋白的表达;菌体内酶活在诱导72h后达最大,为每克湿菌体0.372U。

将hA Ⅰ重组到大肠杆菌表达载体pET30a,构建重组质粒pET30a-hA Ⅰ,转化至大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),得到基因工程菌BL21(DE3)(pET30a-hA Ⅰ)。

经1mM IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导7h后,菌体酶活达每克湿菌体34.6U。

SDS-PAGE分析表明,诱导后的BL21(DE3)(pET30a-hA Ⅰ)在约35kD处有明显的蛋白表达,与理论值相符..……

全文目录


文摘
英文文摘
论文说明:符号与缩略语说明
1引言
2材料和试剂
3人Ⅰ型精氨酸酶基因在毕赤酶母中的分泌表达
4人Ⅰ型精氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达
结论
附录
参考文献

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中图分类: > Q55 > 生物科学 > 生物化学 > 酶
其他分类: > Q78 > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)

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