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eNOS基因转染抑制血管损伤后平滑肌细胞增生的实验研究

专 业: 内科学 心血管专业
关键词: 真核表达载体 内皮型一氧化氮合酶eNOS 血管平滑肌细胞 再狭窄 转染
分类号: R5  R654.2  R457.2
形 态: 共 61 页 约 39,955 个字 约 1.911 M内容
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内容摘要


基因治疗是将一个有治疗作用的基因片段,通过各种载体介导,转移至作用部位,使其在局部发挥作用,从而避免了对全身产生副作用。

该实验通过构建含有目的基因eNOS cDNA的真核表达载体pcDNA3.1-内皮型一氧化氮合酶pcDNA3.1-eNOS,转染血管损伤后大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞,观察其对损伤后血管平滑肌细胞增生的抑制作用。

第一部分真核表达载体pcDNA3.1-内皮型一氧化氮pcDNA3.1-eNOS的构建方法:

利用限制性内切酶EcoR Ⅰ将原核载体pUC13-eNOS酶切并提取其中的eNOS cDNA,与真核载体pcDNA3.1-通过EcoR Ⅰ相连接,构建成pcDNA3.1-eNOS真核表达载体,并经限制性内切酶酶切及PCR技术鉴定重组载体是否含有目的基因eNOS cDNA。

第二部分大鼠颈总动脉球囊损伤后再狭窄模型的建立及血管平滑肌细胞的体外培养方法:1制备Wastar大鼠左侧颈总动脉球囊损伤后再狭窄模型,经组织病理切片进行HE和Verhoeff铁苏木精染色观察血管再狭窄程度;2进行血管平滑肌细胞的体外培养,应用抗平滑肌细胞的α-actin抗体鉴定平滑肌细胞。

第三部分eNOS基因转染对大鼠球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖规律的影响及对血管再狭窄程度的影响方法:1以Fugene 6作为载体将pcDNA3.1-eNOS基因转染至体外培养的Wastar大鼠颈总动脉球囊损伤后的血管平滑肌细胞,应用RT-PCR、原位杂交及免疫荧光染色方法检测细胞内pcDNA3.1-eNOS基因和eNOS蛋白的表达,应用MTT法检测转染对细胞增殖规律的影响;2以Fugene 6作为载体将eNOS基因体内转染至Wastar大鼠颈总动脉损伤后的血管平滑肌细胞,应用RT-PCR法检测细胞内pcDNA3.1-eNOS基因的表达,应用组织病理学方法观察血管的再狭窄程度……

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英文缩略词表
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 真核表达载体pcDNA3.1-内皮型一氧化氮合酶eNOSpcDNA3.1-eNOS的构建
第二部分 大鼠颈总动脉球囊损伤后再狭窄模型的建立及血管平滑肌细胞的体外培养
第三部分 eNOS基因转染对大鼠球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖规律及对血管狭窄程度的影响
结论
参考文献
综述基因治疗PTCA术后再狭窄的研究进展

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中图分类: > R5 > 医药、卫生 > 内科学
其他分类: > R654.2 > 医药、卫生 > 外科学 > 外科学各论 > 心脏血管和淋巴系外科学
其他分类: > R457.2 > 医药、卫生 > 临床医学 > 治疗学 > 血液疗法

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