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AGEs诱导足细胞表达MCP-1以及细胞内信号传导机制的实验研究

专 业: 内科肾脏病学
关键词: 肾小球疾病 巨噬细胞 溶酶体酶 趋化因子 单核细胞趋化因子-1 细胞外信号调节激酶
分类号: R5  R692.310.2
形 态: 共 54 页 约 35,370 个字 约 1.692 M内容
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内容摘要


该研究的目的是证明RAGE配体AGEs和CML是否能直接诱导足细胞表达MCP-1,并了解RAGE激活后的细胞内信号传导途径.我们使用条件不朽的小鼠足细胞株进行研究.RT-PCR和ELISA的方法检测小鼠足细胞的MCP-1的基因表达和蛋白质的产生.应用激光共聚焦显微镜观察AGEs和CML诱导的细胞内氧自由基ROS.Western blotting、EMSA、免疫细胞染色和免疫组织化学染色等方法检测细胞外信号调节激酶,NF-κB和Sp1蛋白的激活.RT-PCR检测PKC和PI3K在RAGE信号传导中的作用.结果显示1、AGEs可以以时间依赖的方式诱导足细胞表达MCP-1基因,AGEs刺激足细胞4小时时MCP-1的mRNA表达达到最高.AGEs和CML均可以以剂量依赖的方式诱导足细胞表达MCP1.ELISA结果提示使用AGEs和CML刺激的足细胞,8小时起MCP-1蛋白的表达高于BSA孵育的足细胞,分别是7.44±1.01,8.06±0.96pg/mg和3.766±0.3pg/mgp<0.01,24小时后MCP-1的表达分别增加到87.78±9.32,85.35±9.83和17.95±0.76pg/mg,p<0.0001.2、RAGE的另外一个配体,S100蛋白,也能以剂量依赖的方式诱导足细胞表达MCP-1.RAGE中和抗体完全阻断了AGEs、CML和S100的作用.3、我们发现血清饥饿的足细胞细胞核内存在基础性的自由氧离子ROS,AGEs和CML均可以诱导细胞浆内快速产生ROS.N-乙酰-L-半胱氨酸NAC可以抑制基础的和诱导性的ROS形成,而RAGE中和抗体则完全抑制诱导性的ROS产生.NAC也直接抑制了CML以及外源性H2O2诱导的MCP-1的表达.使用CML刺激足细胞后10分钟就可以发现磷酸化的ERK产生,30-60分钟达到最高.直到CML刺激足细胞120分钟仍没有发现磷酸化的P38MAPK和SAPK/JNK表达或上调.然而使用NAC,AFC预处理细胞可以完全防止ERK的激活并抑制MCP-1基因表达,而PD98059虽然阻断了ERK的激活却并不能完全抑制MCP-1的mRNA的产生.我们没有发现p38MAPK、SPAK/JNK、PI3K和PKC在信号传导中扮演任何角色.4、在CML的刺激足细胞60分钟后,细胞核中的转录因子NF-κB和Sp1增加.ERK的磷酸化抑制剂PD98059直接抑制NF-κB的激活,而不影响细胞核内Sp1的表达增多.Parthenolide和光辉霉素A,NF-κB和Sp1的抑制剂,剂量依赖地抑制MCP-1的基因表达……

全文目录


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引言
第一节 AGEs和CML的体外合成
材料与方法
结果
第二节 AGEs和CML对足细胞表达MCP-1的影响
材料与方法
结果
第三节 晚期糖基化产物受体RAGE在AGEs和CML诱导足细胞表达MCP-1中的作用
材料与方法
结果
第四节 RAGE激活后的细胞内信号传导
材料与方法
结果
第五节 NF-κB、c-Jun和Sp1在足细胞MCP-1基因表达中的作用
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
综述 RAGE细胞内信号传导与肾小球疾病关系的研究进展

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中图分类: > R5 > 医药、卫生 > 内科学
其他分类: > R692.310.2 > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学(泌尿生殖系疾病) > 肾疾病

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