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比较不同胚胎时期神经干细胞的增殖、分化和凋亡

专 业: 神经外科
关键词: 神经干细胞 胚胎发育 细胞增殖 细胞分化 细胞凋亡 脑皮质发育
分类号: Q418  R741
形 态: 共 50 页 约 32,750 个字 约 1.567 M内容
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内容摘要


目的

通过比较E14、E18和E20三个不同胚胎时期NSCs的增殖、分化和凋亡,认识NSCs生物学性状的变化,了解胚胎脑皮质发育过程,为胚胎脑皮质发育机制提供理论依据。

方法

1.NSCs的原代培养取E14、E18和E20三个胚胎时期SD大鼠孕鼠前脑皮质,进行NSCs无血清原代培养,6d后形成成熟的神经细胞球。

2.NSCs的鉴定把神经细胞球接种于涂有多聚赖氨酸的玻片上,2h后运用免疫荧光方法对其进行Nestin标记。

3.NSCs的增殖检测把1×105

ml的NSCs接种于96孔细胞培养板100μl

孔。

48h后用BrdU标记NSCs,再24h后进行处理,酶标仪检测NSCs的增殖后的0.D.值。

4.NSCs的分化检测把0.8x105

ml的NSCs接种于6孔细胞培养板1ml/孔,孔底置涂有多聚赖氨酸的玻片。

胎牛血清诱导分化7d后,分别用MAP2和GFAP特异性标记分化后的神经元细胞和星形胶质细胞,同时进行Hoechst33342细胞核染色。

在200倍免疫荧光镜下,各分别随机选取10个视野,计算MAP2阳性细胞和GFAP阳性细胞占Hoechst阳性细胞的各自比例。

5.NSCs的凋亡检测把1×105

ml的NSCs接种于24孔细胞培养板1ml/孔。

72h后用AnnexinV-FITC和PI标记,流式细胞仪检测NSCs‘的早期凋亡率。

结果

1.三个不同胚胎时期脑皮质来源的NSCs在原代培养6d后,都能得到相当数量的成熟神经细胞球。

免疫荧光染色显示Nestin阳性。

2.增殖检测结果:

OD.值分别为:

E14为1.1771±0.0422n=22,E18为0.4127±0.0328n=23,E20为0.2117±0.0456n=16。

每两者之间都具有显著性差异均为P<0.001.3.诱导分化检测结果:

E14神经元细胞比例和星形胶质细胞比例分别为:

81.96%±4.91%n=10和16.63%±4.05%n=10,E18为27.56%±3.54%n=10和58.98%±5.91%n=10,E20为4.75%±2.39%n=10和89.43%±3.40%n=10。

三者之间的神经元细胞比例和星形胶质细胞比例都有显著性差异均为P
早期凋亡率分别为:

E14为41.12%±9.75%n=8,E18为56.30%±9.35%n=19,E20为5.74%±3.31%n=9。

每两者之间都具有显著性差异均为P
1.NSCs的增殖能力随着胚胎发育变得越来越弱,而凋亡比例先小后大,最后逐渐变小。

E14时期的高增殖低凋亡状态使E14后脑皮质继续明显增大。

E18时期较大比例的凋亡使脑皮质变化趋向稳定状态。

E20后的低增殖能力和低凋亡比例使大鼠脑皮质在临近出生时期以及出生后都保持相对稳定。

2.NSCs分化为神经元细胞的比例随着胚胎发育过程会越来越小,而星形胶质细胞的比例会越来越大..……

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缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
结果
分析与讨论
小结
参考文献
附录
神经干细胞中枢神经系统移植的研究进展

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中图分类: > Q418 > 生物科学 > 生理学 > 普通生理学 > 生长、发育与生殖
其他分类: > R741 > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学

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