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硫酸盐还原菌亚硫酸盐还原酶的初步研究

专 业: 生物化工
关键词: 硫酸盐还原菌 亚硫酸盐还原酶 分离纯化 酶学性质 发酵工艺
分类号: TQ111.14  TQ125.14
形 态: 共 53 页 约 34,715 个字 约 1.661 M内容
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内容摘要


亚硫酸盐还原酶在亚硫酸盐转化为硫化物的过程中,是起关键催化作用的酶。

因此,对其发酵工艺条件、分离纯化和酶学性质进行研究,可为亚硫酸盐还原酶工业化提供基本依据。

发酵工艺条件主要包括碳源、氮源、温度、起始pH、装液量及发酵周期等。

通过摇瓶单因素实验,综合考虑酶活力、菌体生长、经济因素、确定以可溶性淀粉作为碳源,以尿素作为氮源,并在此基础上进行碳氮比实验。

碳氮比实验结果显示:

当碳氮比为1:

3时,OD和酶活均最高。

得出的产亚硫酸盐还原酶发酵培养基为:

KCl 0.3g ;MgSO<,4>-7H<,2>O 3.0g;MgCl<,2>-6H<,2>O 2.5g;NH<,4>Cl 0.5g:NaCl 1.0g;KH<,2>PO<,4> 0.6g;可溶性淀粉2.0g;尿素6.0g;抗坏血酸0.5g;L-Cys半胱氨酸0.5g;FeSO<,4>NH<,4>2SO<,4>-6H<,2>O 2.0g其中Vc、半胱氨酸、FeS04-NH<,4>2SO<,4>-6H<,2>O在培养前加入。

通过对SRB发酵产酶的培养条件进行优化,其结果为:

以5%的接种量接种到150mL的锥形瓶中,装液量为.50mL,,初始pH值为7,培养温度为35℃,摇床培养42h;经优化培养后,酶活达到16.2U

mL。

通过盐析、透析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-52纤维素柱层析一系列纯化步骤,亚硫酸盐还原酶相对于粗酶液纯化了115.30倍,酶比活力由0.6U

mg提高到69.18U

mg,酶回收率为18.36%,电泳分析为单一条带,达到了电泳纯。

以亚硫酸钠为底物,对亚硫酸盐还原酶的酶学性质进行了研究。

结果表明,酶反应的最适温度和最适pH分别为30℃和7.7;热稳定性较好,80℃时酶活性仍能维持在55%左右;pH4~10之间均较稳定,残余酶活都在60%以上;Fe<3+>、cu<2+>、Mn<2+>、Co<2+>对亚硫酸盐还原酶有明显的抑制作用,ca<2+>、Zn<2+>、Ag<+>.Fe<2+>对亚硫酸盐还原酶有轻微的抑制作用,其他离子在实验浓度范围内对酶活无明显影响;该酶的Km为1.23mmol

L,Vmax为6.80U

mL;通过SDS-PAGE,测得亚基相对分子质量为66KDa..……

全文目录


文摘
英文文摘
第一章 文献综述
第二章 硫酸盐还原菌产亚硫酸盐还原酶的发酵工艺研究
第三章 亚硫酸盐还原酶的分离纯化
第四章 亚硫酸盐还原酶的酶学性质
第五章 结论
参考文献

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中图分类: > TQ111.14 > 工业技术 > 化学工业 > 基本无机化学工业 > 无机酸类生产
其他分类: > TQ125.14 > 工业技术 > 化学工业 > 非金属元素及其无机化合物化学工业 > 第ⅵ族非金属元素及其无机化合物

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