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色谱饼的优化设计及其在生物工程中的应用

专 业: 分析化学
关键词: 色谱饼 分布器 径向装柱法 蛋白质复性和纯化 重组人粒细胞集 落刺激因子
分类号: Q81  O657
形 态: 共 68 页 约 44,540 个字 约 2.131 M内容
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内容摘要


该论文内容分为三个部分。

1.以评价色谱柱的方法对色谱饼进行了评价,发现用于分离生物大分子的疏水填料并不遵循分离小分子填料的规律。

另外,仍以短柱理论为理论基础,在原液流分布器以下简称分布器的基础上设计出多种液流分布器,并用不同的方法对液流分布器的合理性进行了判断,挑选出对液体分布性能更好的分布器,使其吸附量在容量因子k=10。

54时比原分布器提高约4。

43mg,约33.8%左右。

在原装柱方法的基础上,还设计了两种新的装柱方法,其中一种较好的装柱方法吸附量在容量因子k=9。

87时比原装柱方法提高了8。

36mg,提高约67。

5。

2.研究了一种弱阴离子交换WAX色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子rhG-CSF的复性并同时纯化的方法。

将大肠杆菌E。

coli表达的存在于包涵体中的rhG-CSF用脲提取并用巯基乙醇还原变性后,在流动相中有一定浓度的脲及氧化-还原谷胱甘肽存在条件下,对rhG-CSF进行复性的色谱条件进行了优化。

在30 min内可得到纯度95、比活为1.9×10<8>IU/mg的rhG-CSF,质量回收率为27。

该法可在进样时生成沉淀的条件下正常进行色谱操作,并以周期性溶解沉淀的方式,再用WAX色谱饼复性方法提高rhG-CSF的质量及活性回收率。

可望普遍用于蛋白质复性及同时纯化工业生产。

3.研究了一种用聚合物基质的WCX色谱饼对重组人干扰素-γ复性并同时纯化的方法,将大肠杆菌E。

coli表达的存在于包涵体中的rhIFN-γ用脲提取,对rhIFN-γ进行复性的色谱条件进行了优化。

在30 min内可得到纯度大于97、比活为4。

3×10<7>IU/mg的rhIFN-γ,质量回收率为48。

9。

相对于文献中报道的方法,该方法步骤少,操作简单。

在实验中采用了色谱饼装填聚合物基质的填料,使该种填料有了更为广泛的应用,并提高了色谱饼的吸附量,可望用于工业生产……

全文目录


第一章 导论
1.1 制备型液相色谱进展
1.1.1 制备色谱理论
1.1.2 短柱理论
1.2 制备型色谱柱设计及装柱方法进展
1.2.1 色谱柱的设计
1.2.2 装柱方法
1.3 重组蛋白质的复性并同时纯化
参考文献
第二章 实验部分
2.1 仪器与试剂
2.1.1 仪器
2.1.2 试剂
2.1.3 试剂配制
2.2 rhG-CSF效价测定
2.3 rhIFN-γ效价测定
2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.5 Bradford比色法测定蛋白含量
2.6 Knox曲线的测定方法
2.7 死时间的测定
2.8 浓度突破量的测定
2.9 吸附量的测定
参考文献
第三章 色谱饼的优化设计
3.1 概述
3.2 色谱饼的总体设计
3.3 色谱饼评价的探索
3.4 分布器的优化设计
3.5 分布器的性能检验
3.6 装柱方法的优化
3.7 小节
参考文献
第四章 WAX色谱饼对rhG-CSF的复性并同时纯化
4.1 概述
4.2 结果与讨论
4.2.1 流动相的组成
4.2.1.1 脲浓度
4.2.1.2 缓冲液
4.2.1.3 洗脱剂的选择
4.2.3 GSH/GSSG比例
4.2.4 流速
4.2.5 pH值
4.2.6 NH_4_2SO_4的最佳浓度
4.2.7 SDS-PAG及免疫活性鉴定
4.2.8 质量回收率
4.3 结论
参考文献
第五章 聚合物基质WCX色谱饼对rhIFN-γ的复性与同时纯化
5.1 概述
5.2 结果与讨论
5.2.1 pH
5.2.2 缓冲液
5.2.3 蛋白浓度
5.2.4 洗脱剂
5.2.5 流速
5.3 活性测定及纯度测定
5.4 结论
参考文献

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中图分类: > Q81 > 生物科学 > 生物工程学(生物技术)
其他分类: > O657 > 数理科学和化学 > 化学 > 分析化学 > 仪器分析法(物理及物理化学分析法)

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