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胶原蛋白及其降解物的液质联用分析及应用

专 业: 生物化工
关键词: 胶原蛋白 酶解 高效液相色谱 质谱
分类号: TS512  O657.63
形 态: 共 65 页 约 42,575 个字 约 2.037 M内容
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内容摘要


胶原蛋白是良好的生物材料,不同类型的胶原蛋白其应用领域各异;同时,对结缔组织中诸多胶原病理变化及其相关性疾病研究表明,在不同疾病中各种类型胶原蛋白的含量、分布、表达、代谢及其动态变化各有其独特性。

传统的胶原蛋白分析主要是针对不同类型的胶原蛋白采用不同的检测手段,过程繁琐、灵敏度低而且误差较高,重现性差,因此,建立一种可对不同类型胶原蛋白进行同步分析鉴定的方法十分重要。

本研究课题包括胶原蛋白变性温度的测定、酶解条件的优化和不同类型胶原蛋白降解产物的对比鉴别,建立了一套有关胶原蛋白变性-酶解-不同类型之间比较鉴定的方法模式。

首先利用紫外分光光度计跟踪分析了胶原蛋白溶解度随温度的变化,确定了胶原蛋白在1M NaCl/50mM pH值为8。

1的Tris-HCl缓冲液中的最适变性温度:

50℃水浴中加热2~3小时;并利用高效液相色谱-紫外检测器进行了图谱分析,结果表明热变性后肽段分子量集中于十万左右,胶原蛋白的超螺旋结构被破坏,螺旋体解开,并且没有明显的随机降解;第二,利用胰蛋白酶降解了不同类型的胶原蛋白,研究了酶用量、酶解时间和温度等因素对胶原蛋白降解过程的影响,采用高效液相色谱-紫外光检测器作为分析手段,对酶解条件进行优化,优化结果为:

酶用量1%,pH值8。

1~8。

2,温度37℃,降解约20小时后,不同类型的胶原蛋白降解较完全,凝胶过滤色谱分析结果表明降解产物分子量范围在一万以下;并利用高效液相色谱-蒸发光检测以及与质谱联用分析了不同类型胶原蛋白的酶解液,找出了不同类型胶原蛋白之间的差别。

对该方法进行方法学考察,结果良好。

本课题结果表明利用酶解产物进行胶原蛋白类型鉴别的方法具有可行性,可作为潜在的检测和诊断方法,快速准确的鉴定出病变组织中含有的胶原蛋白的种类、含量,或变异位点,为疾病的诊断、确定病因提供帮助……

全文目录


文摘
英文文摘
注释说明清单
引 言
1文献综述
1.1胶原蛋白基本特征
1.2胶原蛋白的降解
1.2.1化学裂解
1.2.2内切蛋白酶消化
1.3胶原蛋白消化产物的分析
1.3.1高效液相色谱在胶原蛋白及其降解物分析中的应用
1.3.2质谱在蛋白质组分析中的应用
1.3.3质谱在蛋白质和多肽测序组技术中的应用
1.4存在问题
1.5本文的研究内容
2胶原蛋白变性条件的测定
2.1胶原蛋白变性方法的选择
2.2蛋白质浓度的测定
2.2.1基本原理
2.2.2试验材料、试剂与仪器设备
2.2.3试验步骤
2.2.4结果分析
2.3凝胶过滤色谱分析变性胶原蛋白
2.3.1基本原理
2.3.2试剂、仪器及试样制备
2.3.3操作步骤
2.3.4结果分析
2.4本章小结
3胶原蛋白酶法降解及条件优化
3.1基本原理
3.1.1酶促反应基本原理
3.1.2高效液相色谱作定量分析
3.2试剂与仪器设备
3.3操作步骤
3.4结果分析
3.5本章小结
4胶原蛋白水解物反相高效液相色谱/蒸发光检测分析
4.1工作原理
4.1.1反相高效液相色谱分析原理
4.1.2蒸发光检测器工作原理
4.2试剂、仪器及试样准备
4.2.1试剂
4.2.2仪器
4.2.3试样制备
4.3操作步骤
4.4结果分析
4.5本章小结
5胶原蛋白水解物液质联用分析
5.1质谱技术应用原理
5.2试剂、仪器设备及样品制备
5.3操作步骤
5.4结果分析
5.4.1多肽混合物MALDI-TOF MS分析
5.4.2多肽混合物LC/ESI-MS分析
5.5本章小结
6方法可行性分析-明胶来源鉴别
6.1试剂及仪器设备
6.2操作步骤
6.3结果分析
6.3.1明胶MALDI-TOF MS分析
6.3.2明胶降解物液质联用分析
6.4本章小结
结论
参考文献

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中图分类: > TS512 > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 皮革工业 > 皮革学 > 生皮组织学
其他分类: > O657.63 > 数理科学和化学 > 化学 > 分析化学 > 仪器分析法(物理及物理化学分析法)

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