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极端嗜热古菌S5菌株的硫氧化还原酶基因sor的克隆、表达及Sulfolobus-E.coli穿梭载体/受体系统的构建

专 业: 微生物学
关键词: 极端嗜热古菌 硫氧化酶 还原酶 硫化叶菌属
分类号: Q933
形 态: 共 114 页 约 74,670 个字 约 3.572 M内容
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内容摘要


该研究首先基于16SrRNA基因序列分析,DNA-DNA杂交并结合一些生理生化性质,对早先分离自中国云南的极端嗜热古菌S5株进行了重新分类定位,并鉴定为一个新种Acidianustengchongensessp。

nov,模式菌株为S5。

进而,基于当前唯一可以利用的一个嗜热古菌的硫氧化酶/还原酶基因sor序列,设计了几个引物并成功地从S5基因组中克隆到了sor基因及几个未知功能的邻近编码框序列。

该研究中也成功地在S。

solfataricus和E。

coli之间发展了两类新型的穿梭载体,它们能在两个宿主S。

solfataricus和E。

coli中复制和表达。

第一类以尿密啶核苷酸合成基因突变株pyrEF为受体菌,野生型pyrEF为选择标记构建了两个低拷贝穿梭载体pHEF和pEFAsp;第二类利用小的高拷贝古菌质粒pSSVx和HygromycinB抗性基因hph,构建了两个高拷贝的穿梭载体pUVFl和pUVF2.它们能使药物敏感的S。

solfataricus获得很好的HygromycinB抗药性……

全文目录


文摘
英文文摘
第一部分 文献综述
一、极端嗜热古菌概况
二、极端嗜热古菌及其它硫自养型微生物中无机硫的氧化机制及其分子遗传学研究进展
三、极端嗜热古菌的遗传系统研究进展
四、极端嗜热古菌研究和应用潜力、存在问题和本研究目标
第二部分 材料与方法
一、实验材料
一菌株和质粒
二培养基
三缓冲液、生物酶及其他
二、实验程序与方法
一微生物的培养
二DNA抽提
三DNA片段回收
四DNA连接
五感受态细胞的制备与转化
六探针标记与杂交
七酶与蛋白质分析
三、主要仪器与设备
第三部分 研究结果与讨论Ⅰ Acidianus sp.S5的硫氧化还原酶基因sor的克隆与表达
引言
第一章 极端嗜热古菌S5菌株的系统学位置和重新分类定位
一、有关S5菌株的背景工作
二、16S rRNA为基础的S5的系统发育学地位分析
三、形态生理特征
四、DNA-DNA同源性分析
五、S5菌的分类地位的重新确定
第二章 S5菌株的硫氧化还原酶基因的克隆和序列分析
一、基因克隆探针的设计和制备
二、部分基因文库的构建
三、基因文库的筛选和阳性克隆的鉴定
四、克隆片段的DNA序列分析
第三章 SOR基因在E.coli中的表达与特性分析
一、表达载体的构建
二、SOR蛋白在E.coli中的表达分析
第四章 小结与讨论
第四部分 研究结果与讨论Ⅱ极端嗜热古菌Sulfolobus与E.coli之间穿梭载体受体系统构建
引言
第一章 基于pyrEF基因突变为基础的穿梭载体受体系统的构建
一、pyrEF基因突变株的筛选和鉴定
二、穿梭载体的构建
三、Sulfolobus转化子的筛选和鉴定
四、关于载体质粒的稳定性
第二章 基于质粒pSSVx复制子为基础的高拷贝穿梭载体的构建
一、质粒pSSVx的复制子的克隆
二、系列穿梭载体的构建
三、转化子的筛选和鉴定
四、关于载体的稳定性
第三章 小结与讨论
一、pyrEF基因缺失突变株
二、关于最小复制子及质粒的复制机制
三、基因表达和新型穿梭载体系统
参考文献
总结

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中图分类: > Q933 > 生物科学 > 微生物学 > 微生物遗传学

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