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酵母Ure2p朊病毒结构域功能的研究及疯牛病和羊瘙痒病的诊断

专 业: 微生物学
关键词: 酵母朊病毒 Ure2p 朊病毒结构域 羊朊蛋白 疯牛病 羊瘙痒病
分类号: Q93  S854.4
形 态: 共 116 页 约 75,980 个字 约 3.634 M内容
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内容摘要


用PCR技术从具有URE3表型的酵母菌3687的基因组DNA中扩增到Ure2p朊病毒结构域PrD基因,克隆到pGEM-T载体中,序列测定结果表明克隆到正确的PrD基因。

用硫酸铵分级沉淀、疏水层析、阴离子交换层析和反相层析纯化PrD蛋白,用Tricine/SDS-PAGE和质谱分析鉴定纯度和分子量。

结果表明Ure2p的朊病毒结构域PrD在体外具有朊病毒蛋白的特点,也表明PrD在URE3表型形成中的重要作用。

将PrD基因与谷胱苷肽-S-转移酶GST基因重组,在大肠杆菌中表达了可溶性的GST-PrD融合蛋白sGST-PrD。

从中国小尾寒羊血液分离的白细胞中提取基因组DNA,用PCR反应扩增出羊的正常朊蛋白OvPrP基因,将其克隆到质粒pUC19中。

用大肠杆菌表达的牛朊病毒正常成熟蛋白BoPrP免疫新西兰白兔,获得了与朊病毒蛋白PrP反应的抗体Tl。

根据致病型朊病毒PrP能抵抗蛋白酶消化的特性,用蛋白酶K消化脑组织朊病毒263K的金黄地鼠的脑组织提取物内检测到抗蛋白酶K消化的致病型PrP

结果表明可以用自制的抗血清检疫牛海绵状脑病和羊瘙痒病,防止其传入中国……

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第一部分 文献综述
第一章 朊病毒的一个新领域—真菌朊病毒
一、朊病毒历史背景
二、酵母朊病毒的遗传特性
1.非盂德尔遗传因子
2.可逆的可治愈性
3.正常蛋白的过量表达增加了出现朊病毒的频率
4.朊病毒与编码蛋白染色体之间的表型关系
三、URE3是一种氮代谢调节蛋白Ure2p的朊病毒形态
1.URE3的遗传特性表明它是一种朊病毒
2.URE3能被可逆性治愈
3.Ure2p的过量表达增加了URE3产生的几率
4.ure2表型与URE3菌株的关系
5.URE3的自发产生
6.URE3菌株中Ure2p的蛋白酶抗性
7.朊病毒结构域与氮调控结构域及其相互关系
四、PSI是一个转录终止因子Sup35p的朊病毒
1.PSI的非孟德尔式表现
2.PSI的可逆性治愈
3.SUP35过量表达可以诱导PSI
4.SUP35是保持PSI的条件
5.PSI+菌株中Sup35p聚合的证据
6.对Sup35朊病毒和释放因子结构域的结构和功能分析
7.影响PSI增殖的生理和环境因素
五、普特斯阿属Podospora异核体的不兼容性与一种新的朊病毒
1.异核体的不兼容性
2.一个影响普特斯阿属het-s的非盂德尔遗传因子
3.Het-s代表了het-s蛋白的一种朊病毒形态
4.关于Het-s系统的问题
5.普特斯阿属Het-s朊病毒与其它朊病毒系统的比较
六、酵母和哺乳动物朊病毒的转换:一个共同机制?
七、Sup35p和Ure2p含有可以转移的朊病毒结构域
八、酵母朊病毒结构域在朊病毒构象转换中的作用
九、是否所有富含Gln+Asn的酵母蛋白都是朊病毒?
十、酵母朊病毒的朊病毒结构域和种间屏障
十一、酵母和真菌朊病毒的应用
十二、酵母朊病毒的结构研究
十三、展望
十四、参考文献
第二章 疯牛病和羊瘙痒病的诊断方法
一、临床症状诊断
二、组织病理学诊断
三、免疫组织化学诊断
四、免疫印迹western blot诊断
五、组织印迹
六、EL1SA
七、DELEIA时间分辨荧光免疫分析
八、其他诊断方法的研究
九、参考文献:
第二部分
第一章 URE2P朊病毒结构域基因的克隆表达及二级结构分析
摘要
一、前言
二、材料
三、方法
四、结果
五、讨论
参考文献
附录:Tricine/SDS-PAGE电泳
第二章 、与酵母URE2P朊病毒结构域融合表达的谷胱苷肽-S-转移酶结构的改变
摘 要
一、前言
二、材料
三、方法
四、结果
五、讨论
参考文献
第三章 中国小尾寒羊朊蛋白基因的基因型属于PRPARH
摘 要
前言
1材料与方法
1.1材料
1.2方法
2.结果
讨论
参考文献
第四章 免疫印迹法检测牛海绵状脑病和羊搔痒病
摘要
前言
材料与方法
结果
讨论
参考文献
结论

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中图分类: > Q93 > 生物科学 > 微生物学
其他分类: > S854.4 > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医临床医学

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