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昆虫激素与CTAB对杆状病毒复制和相关基因启动子活性的影响

专 业: 生物化工
关键词: 昆虫细胞 家蚕 启动子 瞬间表达分析 杆状病毒复制
分类号: Q96
形 态: 共 111 页 约 72,705 个字 约 3.478 M内容
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内容摘要


该文应用杆状病毒表达载体系统BEVS和瞬间表达分析系统transient expression assay system,通过向感染了野生型或重组杆状病毒、或转染了含受控于家蚕杆状病毒极早期基因ie-1启动子的荧光素酶报告基因质粒的宿主施用外源昆虫激素或阳离子表面活性剂十六烷基三乙基溴化铵cetyltriethylammonium brominde,CTAB,研究了外源活性物质对杆状病毒在其宿主中复制和基因表达及对ie-1启动子转录活性的影响。

为了进一步探明外源活性物质调控杆状病毒复制和基因表达的作用机理,通过对杆状病毒囊膜糖蛋白gp64基因启动子的功能分析,进一步研究了外源活性物质通过激活家蚕杆状病毒因子,如极早期基因启动子ie-1的转录活性,反式激活gp64启动子的转录,进而影响受控于晚期基因启动子的基因表达和病毒本身的增殖。

1.昆虫激素对杆状病毒复制的影响;通过向感染了病毒的昆虫细胞培养基中添加适量的昆虫激素以观察昆虫激素对昆虫杆状病毒在其体外培养的宿主细胞中复制的影响。

2.昆虫激素对杆状病毒外源基因表达的影响;蜕皮激素和保幼激素类似物JHA分别处理、或两种激素配合处理均能不同程度地提高β-半乳糖苷酶基因LacZ在感染了BmBacPAK6重组病毒的五龄家蚕幼虫或蛹中的表达,两种激素的配合处理具有显著的协同效应。

3.昆虫激素对BmNPV极早期基因启动子ie-1转录的影响。

4。

CTAB对杆状病毒复制和基因表达的影响;在野生型BmNPV感染家蚕Bm-N细胞的过程中,十六烷基三乙基溴化铵CTAB能通过增加芽生病毒的滴度同时降低包埋型病毒粒子occluded virus,OV的生成而影响两种病毒粒子的生成途径和病毒复制的双相生活循环。

5。

杆状病毒gp64启动子的克隆、测序及功能分析。

6、CTAB通过病毒因子介导增强gp64启动子转录活性。

BmNPV gp64启动子不能被CTAB所直接激活,但能被BmNPV病毒因子MOI=0。

5反式激活约2倍,CTAB0。

1 μg/ml和BmNPVMOI=0。

5共处理能增强该启动子转录活性约5。

2倍,因此,CTAB是通过BmNPV-ZJ8病毒因子所介导而激活gp64启动子的转录活性。

综上所述,昆虫激素及CTAB有效增强极早期基因启动子ie-1的转录活性,这对利用ie-1基因启动子在稳定转化细胞中驱动外源基因的高效表达具有十分重要的意义。

BmNPVhr3除了具有病毒DNA复制原点和增强子的功能外,它还能显著增强热休克蛋白70启动子在Bm-N和Sf-21细胞中的转录活性,这暗示着hr3有可能对应用哺乳动物细胞表达系统生产外源蛋白产品有重要价值。

gp64启动子特性分析及相关研究为广泛应用于分子生物学、诊断及医学等方面的杆状病毒表面展示系统baculovirus surface display的改进提供了一个重要手段。

昆虫激素及CTAB调控杆状病毒在宿主昆虫/细胞中复制和基因表达的研究对提高家蚕杆状病毒表达系统在家蚕生物反应器中进行病毒增殖和外源基因表达的效率及改善家蚕杆状病毒生物杀虫剂的杀虫效果提供了理论基础……

全文目录


文摘
英文文摘
英文缩写说明
前言
第一部分 文献综述
第一章 文献综述
1.1杆状病毒分子生物学
1.2昆虫杆状病毒表达载体系统
1.3昆虫激素调控宿主和杆状病毒相关基因的表达
第二部分 实验设计、材料及方法
第二章 实验目的、内容及方案
2.1实验意义及同类研究工作的国内外现状
2.2实验内容、目标及拟解决的关键问题
2.3实验方案
第三章 材料和方法
3.1实验材料
3.2实验方法
第三部分 昆虫激素与CTAB对杆状病毒复制和相关基因启动子活性的影响
第四章 昆虫激素对杆状病毒复制的影响
4.1 结果
4.2讨论
4.3小结
第五章 昆虫激素对杆状病毒外源基因表达的影响
5.1结果
5.2 讨论
5.3小结
第六章 昆虫激素增强BmNPV极早期基因启动子ie-1转录
6.1结果
6.2讨论
6.3小结
第七章 CTAB对杆状病毒复制和基因表达的影响
7.1结果
7.2讨论
7.3小结
第八章 杆状病毒gp64启动子的克隆及序列分析
8.1结果
8.2讨论
第九章 杆状病毒gp64启动子的特性分析
9.1结果
9.2讨论
9.3小结
第十章 CTAB通过病毒因子介导增强gp64启动子转录活性
10.1结果和讨论
10.2小结
第十一章 结论与创新点
11.1结论
11.2主要创新点
11.3今后研究设想
参考文献

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中图分类: > Q96 > 生物科学 > 昆虫学

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