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二氢叶碱还原酶DHFR和谷氨酰胺合成酶GS双基因筛选及扩增系统的研究

专 业: 微生物学
关键词: 二氢叶酸还原酶 谷氨酰胺合成酶 基因表达 基因筛选扩增 血小板生成素 辅乳动物细胞
分类号: Q933  Q952
形 态: 共 47 页 约 30,785 个字 约 1.473 M内容
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内容摘要


在哺乳动物细胞中表达外源基因可获得在构象及理化性质上更接近天然蛋白质的表达产物,而基因扩增是提高哺乳动物细胞表达产量的重要途径。

目前常用的DHFR及GS基因筛选及扩增系统都有各自明显缺陷,因此考虑将DHFR与GS结合起来建立双基因筛选系统,并探索不同加压方式对双基因筛选系统的影响,从而为以后哺乳动物细胞高效表达外源基因奠定基础。

研究结果表明:

DHFR系统转化效率高40-60克隆/10<5>细胞,GS系统转化效率低10-20克隆/10<5>细胞,DHFR+GS双基因筛选系统转化效率较低接近GS系统。

DHFR系统与GS系统生长有明显差异,DHFR系统细胞生长明显好于GS系;双系统中细胞生长一直较好。

与DHFR系统相比,GS系统与DHFR+GS双系统具有更高的扩增效率,而且,TPO在GS与DHFR+GS双系统表达水平比DHFR系统水平更高,但不同加压方式对双系统的表达水平没有明显影响……

全文目录


中文摘要
英文摘要
英文缩写
前言
材料与方法
1.实验材料
1.1质粒
1.2菌株
1.3细胞株与培养基
1.4 工具酶和主要试剂
实验方法
1质粒的制备、纯化及限制内切酶分析
2表达部分TPO基因混合细胞系的建立
3表达部分TPO基因三种基因筛选及扩增系统的比较
结果
1.质粒的鉴定
2.表达部分TPO基因系统混合细胞系的建立
2.1 DHFR基因系统混合细胞系的建立
2.2GS基因系统混合细胞系的建立
2.3DHFR+GS基因系统混合细胞系的建立
3.表达部分混合细胞系的比较研究
3.1细胞生长特性
3.2打点杂交检测基因拷贝
3.3活性检测
讨论
结论
综述 血小板生成素的研究进展
参考文献

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中图分类: > Q933 > 生物科学 > 微生物学 > 微生物遗传学
其他分类: > Q952 > 生物科学 > 动物学 > 动物细胞学

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