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舞毒蛾NPV多角体蛋白基因的克隆、测序和表达

专 业: 森林保护
关键词: 舞毒蛾核型多角体病毒 多角体蛋白基因 序列测定 原核表达 基因克隆 基因表达
分类号: Q962  S433.4
形 态: 共 47 页 约 30,785 个字 约 1.473 M内容
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内容摘要


该论文对舞毒蛾核型多角体病毒LdMNPV进行了克隆、测序和表达。

首先纯化了LdMNPV,然后从LdMNPV中提取总DNA,以primer 15 CC CAT ATG CAC AAC TTT TAC AAC TAC 3和primer 25 CC AAG CTT AGT ACG CCG GTC CTTG 3为引物,LdMNPV为模板做PCR,克隆出LdMNPV多角体蛋白基因。

将该基因连接到T-Vector上,通过筛选,得到含LdMNPV多角体蛋白基因的T-Vector阳性克隆。

对T-Vector上的LdMNPV多角体蛋白基因进行序列测定表明,LdMNPV多角体蛋白基因的ORF有735个碱基,其中有两个碱基与文献中Ian R。

L。

Smith等,1988记载的不同,即文献中的序列第378位上是C,第507位是T;该论文测得的相应位置的碱基分别是T和C,但它们所编码的氨基酸却相同,即分别编码精氨酸和异亮氨酸。

以质粒pT7-7为载体、大肠杆菌B L21D E3为受体菌对LdMNPV多角体蛋白基因进行了原核表达……

全文目录


文摘
英文文摘
1前言
2文献综述
2.1核型多角体病毒Nuclear polyhedrosis viruses,NPV
2.1.1 NPV的分类地位
2.1.2 NPV的形态结构
2.1.3 NPV多角体的理化性质
2.1.4 NPV侵染昆虫的过程
2.1.5 NPV的基因表达
2.2 L dMNPV分子生物学简介
2.2.1第一张L dMNPV限制性内切酶图
2.2.2 LdMNPV几种基因在其基因组上的定位
2.2.3 egt基因
2.2.4 P39基因
2.2.5 LdDNA聚合酶基因DNA pol
2.2.6 PEpolynedron envelope基因
2.2.7多角体蛋白polyhedrin基因
2.3杆状病毒表达系统及杆状重组病毒
2.3.1杆状病毒表达系统和表达载体
2.3.2杆状重组病毒的产生
2.3.3基因工程病毒杀虫剂重组病毒杀虫剂
2.3.4用于外源基因表达的LdMNPV的基因工程
3舞毒蛾NPV多角体蛋白基因的克隆、测序、和表达
3.1研究NPV多角体蛋白基因的意义
3.2材料和方法
3.2.1舞毒蛾N P VLdMN P V的获得与纯化
3.2.2 LdMN PV总DNA的提取
3.2.3引物的设计
3.2.4 LdMNPV多角体蛋白基因的分离
3.2.5用pGEM T-vector克隆PCR产物
3.2.6大肠杆菌DH5 α感受态的制备
3.2.7把3.2.5中的克隆产物转化入DH5 α感受态细胞
3.2.8蓝/白斑筛选
3.2.9 LDMNPV多角体蛋白基因——PGEMT-vector克隆的筛选
3.2.10 LdMNPV多角体蛋白基因的序列测定
3.2.11用试剂盒提取插有外源基因多角体蛋白基因的T-Vector质粒
3.2.12 双酶切载有外源基因的T-Vector质粒
3.2.13从琼脂糖凝胶中回收外源DNA片段LdMNPV多角体蛋白基因
3.2.14酶切pT7-7质粒
3.2.15把LdMNPV多角体蛋白基因克隆连接到pT7-7表达质粒
3.2.16筛选3.2.15中的阳性克隆产物连接产物.
3.2.17 LdMNPV多角体蛋白基因在BL21DE3菌株中的表达
3.2.18用聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE检测LdMNPV多角体蛋白
3.3结果与分析
3.3.1 LdMNPV多角体蛋白基因的分离
3.3.2 PGEM T-vector质粒
3.3.3 LdMNPV多角体蛋白基因的序列测定
3.3.4从T-vector上双酶切LdN P V多角体蛋白基因
3.3.5 pT7-7质粒表达载体及其酶切
3.3.6把LdMNPV多角体蛋白基因克隆进T7质粒
3.3.7 LdNPV多角体蛋白基因的原核表达
3问题与讨论
参考文献

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中图分类: > Q962 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫细胞学
其他分类: > S433.4 > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 植物虫害及其防治

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