优秀研究生学位论文题录展示

米蛾等昆虫的Drs基因序列筛查及Drs-lH的克隆

专 业: 特种经济动物饲养
关键词: 昆虫抗真菌肽 简并PCR 米蛾 电子克隆
分类号: Q963
形 态: 共 67 页 约 43,885 个字 约 2.099 M内容
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内容摘要


该研究首先根据GenBank上的黑腹果蝇Drosophlia melanogaster抗真菌肽Drosomycin和叔白颜果蝇Drosophilatriauraria抗真菌肽Drosomycin-likeA/B的氨基酸序列同源比对结果,选取同源性比较高的区段设计简并引物,参考密码子使用数据库http:

//www。

kazusa。

or。

jp/codon,选用几种昆虫Tenebrio molitor,D。

melanogaster,Holotrichia diomphalia,Sarcophagaperegrina已公布的球蛋白globin基因密码使用频度中比较高的密码子,优化设计了一对简并引物SFP/SRP,使其简并度降低到48/64,两者的退火温度更加接近。

在试验中仍然采用了热启动法和单双引物对比PCR扩增法,有效地解决了简并引物扩增谱中单引物扩增带的干扰问题肖业臣,2003;魏剑波,2003.使用上述SFP/SRP简并引物,在基因组水平上对8种供试拟靶昆虫进行了PCR扩增筛查,从拟澳洲赤眼蜂成虫Trichogramma confusum、美洲大蠊Periplaneta americane、中国家蝇Musca domestica vicina和米蛾Corcyra cephalonica得到阳性扩增带。

将这些阳性扩增带克隆到pGEM-T Vector中,转化E。

coli DH5α,在含有X-Gal、IPTG和Amp的LB平板上,利用蓝白斑筛选含有外源插入片段的重组质粒,经PCR鉴定和酶切鉴定后对阳性克隆进行测序……

全文目录


文摘
1前言
2材料与方法
2.1材料
2.1.1供试的8种昆虫及其拉丁学名
2.1.2菌种、载体及真菌
2.1.3主要仪器及设备
2.1.4主要药品及试剂
2.1.5培养基与缓冲液
2.2方法
2.2.1赤眼蜂基因组DNA的抽提方案(资源环境学院昆虫学系基因多样性实验室提供)
2.2.2昆虫基因组DNA的抽提
2.2.3用作筛查的PCR引物的设计
2.2.4用作筛查的PCR扩增体系及扩增参数
2.2.5目的片段的回收
2.2.6 PCR产物的克隆
2.2.7阳性克隆的鉴定
2.2.8重组质粒DNA的测序
2.2.9用网上资料和软件分析克隆到的米蛾等昆虫简并引物扩增片段的序列特征
2.2.10米蛾幼虫总RNA的RT-PCR扩增检测
3结果与分析
3.1简并引物的设计
3.2昆虫基因组DNA的PCR筛查结果
3.3双引物扩增片段的克隆及鉴定
3.3.1 PCR鉴定
3.3.2 pGEM -T-MX的BstZ Ⅰ酶切鉴定
3.4测序结果及初步分析
3.5 MX的BlastN分析及网上克隆的组装
3.6 Dro-like H基因结构
3.7 Drosomycin-like HDrs-lH的RT-PCR验证
4讨论
4.1基因克隆技术
4.2用于PCR筛查的简并引物的设计
4.3米蛾拟抗真菌肽基因Drs-lH的发现
5全文结论
主要参考文献
英文摘要
附录A文献综述
附录B论文缩写词中英文对照
附录C测序图谱
附录D

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中图分类: > Q963 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫遗传学

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