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视蛋白基因的克隆及其与抗药性/耐药性关系的研究

专 业: 病原生物学
关键词: 淡色库蚊 昆虫抗药性 溴氰菊酯 基因克隆 基因转染 细胞存活率
分类号: Q963
形 态: 共 119 页 约 77,945 个字 约 3.728 M内容
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内容摘要


长期以来,大范围和不加选择地使用杀虫剂导致了媒介抗药性的发生和发展。

发现和研究新的抗药性相关基因将有助于阐明抗药性的分子基础和寻找新的治理抗药性的靶标。

本研究根据本实验室已经获得的淡色库蚊NYD-OP7~7基因的序列,设计引物,从淡色库蚊抗性品系成蚊cDNA文库中扩增出NYD-OP7基因的全长序列, T/A克隆入pGEM-T Easy载体,经测序、对位拼接获取全长序列。

获得的淡色库蚊NYD-OP7基因长1437bp,开放阅读框为1 11 6 bp,编码371个氨基酸GenBank登录号:

AY749413.用BlastX软件将该基因推导编码的氨基酸序列与蛋白质公共数据库Swissprot分析,用ClustalW软件作序列比对和聚类分析。

推导的氨基酸序列与埃及伊蚊Aedes aegypti和冈比亚按蚊Anophelesgambiae的视蛋白具有80%以上的同源性。

定量PCR 的方法研究其在敏感品系和抗性品系淡色库蚊各发育阶段中的表达差异。

结果显示,NYD-OP7在淡色库蚊溴氰菊酯敏感和抗性品系卵及1、2、3、4龄幼虫中有微弱表达,在蛹及成蚊中有较高表达,而且该基因在抗性品系蛹和成蚊中的表达较敏感品系显著升高。

将该基因克隆入昆虫细胞表达载体pIE1-3,转染蚊C6/36细胞,G418筛选两周后获得稳定表达的细胞系,<3>H-TdR检测结果显示:

各种浓度的溴氰菊酯处理48小时后,在15μM、20μM和25μM浓度组,转染组细胞的存活率较对照组分别升高了11.08%、13.07%和11.10%P<0.05。

综上,所有结果表明,NYD-OP7基因与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关,为一个新的昆虫抗药性相关基因..……

全文目录


第一部分 :淡色库蚊视蛋白基因NYD-OP7的克隆及其与溴氰菊酯抗药性关系的研究
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
结果
讨论
第二部分 :Opsin 3OPN3基因与人肺癌A549细胞紫杉醇耐药性关系的研究
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
结果
讨论
全文小结
参考文献
附录
综述

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中图分类: > Q963 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫遗传学

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