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含抗真菌肽基因拟靶昆虫搜查和dros克隆研究

专 业: 特种经济动物饲养
关键词: 昆虫抗真菌肽 简并引物 搜查 克隆 果蝇基因
分类号: Q963
形 态: 共 59 页 约 38,645 个字 约 1.849 M内容
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内容摘要


该论文以在基因组水平上搜查含新的昆虫抗真菌肽基因的靶昆虫和克隆果蝇Drosomycin基因dros为研究目的,取得了以下新结果:

根据GenBank公布的已知的果蝇抗真菌肽Drosomycin基因6个登录序列的氨基酸高同源区段设计合成一对简并引物Drs1/Drs2,以对可能含有抗真菌肽基因的12种拟靶昆虫进行搜查。

研究中采用热启动法PCR扩增试验,并创建了单、双引物对比扩增方法以锁定拟靶基因序列的扩增带,结果发现昆虫A、D、E、H、I、J显示出阳性信号,初步确定了此6种昆虫为今后继续进行深入研究的新的可能含有抗真菌肽因子的靶昆虫,并为克隆表达鉴定新的昆虫抗真菌肽基因序列奠定了初步基础。

论文同时根据文献已报道的东北大黑鳃龟抗真菌肽holotricin 3 基因和黄色粉蛀虫抗真菌肽tenecin 3 基因的氨基酸序列富含甘氨酸、组氨酸的特点,并分析其高源性区段,设计合成另一对简并引物HT1/HT2,对上述12种昆虫同样进行PCR扩增筛查,但没有得到预期结果,论文对此原因进行了分析和探讨……

全文目录


文摘
论文正文缩写词英汉对照
1前言
2材料与方法
2.1材料
2.1.1供筛查用的12种昆虫及其拉丁学名
2.1.2菌种及质粒
2.1.3主要药品及试剂
2.1.4主要配置溶液
2.1.5克隆用试剂盒及筛选试剂
2.1.6 DNA回收试剂盒
2.1.7培养基
2.1.8主要仪器
2.1.9有关生物信息学网站和网页
2.2方法
2.2.1昆虫基因组模板DNA抽提方法
2.2.2筛查用PCR简并引物的设计与合成
2.2.3 PCR扩增筛查的反应体系及反应条件
2.2.4果蝇抗真菌肽Drosomycin基因的克隆
2.2.5 dros重组质粒的鉴定
3结果
3.1简并引物进行PCR扩增筛查结果
3.1.1简并引物的设计策略
3.1.2 Drs1和Drs2的PCR扩增筛查结果
3.1.3 HT1和HT2的PCR扩增筛查结果
3.2 Drosomycin基因简称drosPCR扩增
3.3 pET-21d-dros重组质粒的鉴定
3.3.1 pET-21d-dros重组载体酶切鉴定
3.3.2 pET-21d-dros重组表达载体PCR鉴定
3.3.3测序鉴定结果
4讨论
4.1发现、鉴定新的昆虫抗真菌肽的研究方法
4.2简并引物的设计策略及应用经验
4.3拟靶基因序列的证实问题
4.4构建Drosomycin基因重组表达载体的意义
5结论
主要参考文献
附录1:文献综述昆虫抗真菌肽研究进展
1昆虫抗真菌肽合成模型分析
2昆虫抗真菌肽抗菌谱分析
3昆虫抗真菌肽序列结构分析
4昆虫抗真菌肽作用机理探讨

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中图分类: > Q963 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫遗传学

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