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粉纹夜蛾二氢叶酸还原酶基因的PCR扩增与克隆

专 业: 昆虫学
关键词: 粉纹夜蛾 二氢叶酸还原酶基因 PCR扩增 克隆 限制性内切酶分析
分类号: Q962  Q969.436.5
形 态: 共 22 页 约 14,410 个字 约 .689 M内容
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内容摘要


该文报道粉纹夜蛾Trichoplusia ni二氢叶酸还原酶基因的PCR扩增及克隆。

根据白纹伊蚊Aedes albopictus、黑尾果蝇Drosop hilamelanog aster两种昆虫二氢叶酸还原酶基因的同源性分析,以蚊编码区的两段保守寡脱氧核苷酸为扩增引物,粉纹夜蛾基固组DNA为模板,PCR扩增出一500bp大小的DNA片段,将此片段回收纯化后与p-T载体连接, 连接产物分别转化大肠杆菌TG<,1>、DH<,5a>菌株,重组质粒用α-互补实验初筛后,挑取白色菌落小量提取质粒DNA,进一步进行限制性内切酶分析,SacⅡ、PstⅠ单酶和双酶切结果 表明重组质粒中确含粉纹夜蛾二氢叶酸还原酶基因的PCR扩增片段……

全文目录


文摘
英文文摘
前言
实验材料和方法
实验材料
一、供试昆虫细胞系
二、供试细菌
三、PGEM-T载体试剂盒
四、限制性内切酶及其它工具酶
五、常用溶液及试剂
实验方法
一、粉纹夜蛾基因组DNA的提取
二、粉纹夜蛾基因组DNA浓度及纯度检测
三、粉纹夜蛾DHFR基因的PCR扩增
四、PCR产物的回收与纯化
五、PCR产物的克隆
六、阳性克隆的筛选与鉴定
实验结果
一、粉纹夜蛾简称TnDHFR基因的PCR扩增
二、PCR产物的克隆
三、重组质粒的鉴定
讨论
一、PCR引物设计
二、PCR反应成分的选择
三、PCR反应条件
四、PCR产物的克隆
五、PCR产物的鉴定
参考文献

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中图分类: > Q962 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫细胞学
其他分类: > Q969.436.5 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫分类学

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