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AVP(4-8)调控基因的新途径研究及大鼠CCTβ在昆虫细胞中的表达

专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: CCTβ Tn昆虫细胞 HexPC 磷脂酰胆碱
分类号: Q96
形 态: 共 75 页 约 49,125 个字 约 2.35 M内容
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内容摘要


第一部分、AVP<,4-8>调控基因的新途径 AVP<,4-8>是精氨酸加压素在脑内的天然酶解产物,具有促进学习记忆的功能,它能在大鼠脑内引起一系列生理生化反尖,RT-PCR结合Southern杂交结果表明,AVP<,4-8>能提高大鼠海马神经元内CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶(CCT)的mRNA水平,以及大鼠海马胶质细胞中c-fos的mRNA水平。

其拮抗剂ZDC(C)PR能够抑制这一作用。

用放线菌素D中止细胞mRNA合成后发现,AVP<,4-8>能提高CCT mRNA和c-fos mRNA的稳定性。

这提示转录后水平的调控是AVP<,4-8>影响一些基因mRNA水平的重要手段。

第二部分、CCTβ在昆虫细胞中的表达和功能研究 利用Baculovirus病毒表达系统,在昆虫细胞Tn中大量表达大鼠CCTβ异构体蛋白。

利用合适的供体质粒在蛋白N端加上6His-Tag,并形成重组的Bacmid病毒。

重组病毒感染的Tn昆虫细胞内,外源基因扩增并表达融合蛋白,酶活性测定实验表明其活性达到了35。

7±1.6nmol/mg/min,是天然脑内CCT活性的10<4>倍。

与天然CCT特性相同,CCT的抑制剂HexPC能显著抑制表达的CCTβ的活性;Zn<2+>,和PO<,4><3->离子对CCTβ的活性也有抑制作用,在底物特异性方面,dCTP与CTP一样,是CCTβ的最适底物。

此外,表达CCTβ的Tn细胞比天然Tn细胞胞内的CDP-胆碱合成的速度有明显提高……

全文目录


文摘
英文文摘
第一部分 AVP4-8调控基因的新途径研究
前言
第一节 AVP4-8引起海马神经元内CCTmRNA水平提高及其机制
摘要
前言
实验材料
实验方法
实验结果
讨论
第二节 AVP4-8对神经胶质细胞中c-fos的影响
摘要
前言
实验材料
实验方法
实验结果
讨论
参考文献
第二部分 CCTβ在昆虫细胞中的表达和研究
前言
第三节 CCTβ在昆虫细胞中的表达
摘要
前言
实验材料
实验方法
实验结果
讨论
第四节 表达蛋白的活性影响因素及其对细胞磷脂酰胆碱合成的影响
摘要
前言
实验材料
实验方法
实验结果
讨论
参考文献
总结

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中图分类: > Q96 > 生物科学 > 昆虫学

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