优秀研究生学位论文题录展示

转p〈35〉基因昆虫细胞系的研究

专 业: 农药学
关键词: 转P<35>基因细胞系 Tn5B1-4细胞 传代效应 昆虫细胞
分类号: Q962  Q78
形 态: 共 40 页 约 26,200 个字 约 1.253 M内容
阅 读: 全文阅读说明

内容摘要


昆虫细胞作为重组病毒的表达载体能成功高效地表达外源基因,生产具有重要医用价值、具备天然活性的生物工程制品,因此昆虫细胞培养倍受青睐。

目前,可通过转基因的方法改良现有细胞,从而获得高产昆虫杆状病毒和外源蛋白的昆虫细胞系。

本研究是利用构建的转P35基因工程细胞系,G418筛选、经单细胞克隆,共得到转P35基因细胞克隆株45株,又通过细胞传代选出克隆株37株。

这37株细胞系分别经PBS、AMD处理,病毒滴度和多角体产量比较筛选出10个克隆株。

10株细胞分别接种昆虫病毒TnGV、TnNPV、MsNPV、PiNPV、AcMNPV,其中仅Tn5B-1-8对所测的所有NPV病毒敏感,即命名为Tn5B-P35简写为Tn5B-35。

Tn5B-35细胞形态主要为纺锤形和圆形,贴壁生长,大小为18.2×41.0μm。

增殖很快,群体倍增时间为22.27h,最大生长密度可达2.14×106cells/mL。

对AcMNPV病毒感染率达95﹪,多角体产量平均为115OBs/cell。

Tn5B-35有较强的营养抗逆性,细胞在无营养的PBS盐缓冲液中1d以后,Tn5B-35细胞有86﹪存活,比野生型Tn5B1-4细胞高出24﹪,第5d时,Tn5B1-4细胞全部死亡,Tn5B-35第5d仍然有42﹪存活细胞。

用含不同浓度放线菌素D的培养基处理Tn5B-35细胞1h,当放线菌素D浓度为0.31,0.62,1.25和2.5μg/mL时,Tn5B-35细胞的存活率分别比Tn5B1-4高出37﹪,55﹪,65﹪和68﹪,当浓度高达5μg/mL时,Tn5B1-4细胞全部死亡而Tn5B-35细胞仍有52﹪的生存率。

说明此细胞具有抗凋亡的特性。

昆虫病毒AcMNPV在Tn5B-35细胞中离体传代25次,病毒未出现传代效应,其病毒滴度、多角体形态及产量、杀虫毒力均无明显变化。

Tn5B-35细胞是昆虫杆状病毒离体复制的优良细胞系。

我们对Tn5B-35细胞的基因组进行PCR鉴定,结果表明转化细胞Tn5B-35含有P35基因,即重组质粒pIZ/V5-His/p35已经整合到细胞的染色体上..……

全文目录


文摘
英文文摘
第一章 文献综述
1.1昆虫细胞培养现状
1.1.1昆虫细胞培养基
1.1.2昆虫细胞系的建立
1.1.3昆虫细胞-杆状病毒表达系统
1.1.4构建基因工程细胞系
1.2昆虫细胞的应用
1.2.1基础研究
1.2.2开发医用疫苗和药物
1.2.3农牧业应用
1.3前景展望
1.4立题依据及目的意义
第二章 材料与方法
2.1试验材料
2.1.1昆虫细胞系
2.1.2昆虫细胞培养基
2.1.3供试昆虫与病毒
2.1.4仪器设备
2.2试验方法
2.2.1培养基的配制
2.2.2人工饲料的配制
2.2.3试剂的配制
2.2.4甜菜夜蛾的饲养
2.2.5细胞克隆
2.2.6细胞克隆株筛选
2.2.7 Tn5B-40细胞克隆株生物学特性测定
2.2.8目的基因p35的PCR鉴定
第三章 结果与分析
3.1转基因细胞可隆株的获得和初筛
3.2细胞克隆株的筛选
3.2.1抗性筛选
3.2.2 AcMNPV病毒滴度及多角体产量比较
3.2.3病毒敏感性比较
3.3 Tn5B-35生物学特性测定
3.3.1细胞形态观察
3.3.2细胞生长曲线
3.3.3 AcMNPV多角体产量测定
3.3.4营养抗逆性
3.3.5 AMD抗性
3.3.6病毒的离体传代
3.4目的基因p35的PCR鉴定
第四章 讨论
第五章 小结
参考文献
附图

相似论文

  1. 小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达,58页,Q786 S436.341.24
  2. 金龟甲性信息素的化学合成及生物测定,64页,Q969.9 S481.1
  3. 偏基苍耳杀虫活性研究,67页,Q969.438.3 S482.3
  4. 转基因抗虫杂交稻(Ⅱ优科丰6号)对稻田节肢动物的影响,52页,Q968.1
  5. 阿维菌素和高温胁迫对朱砂叶螨γ-氨基丁酸及其受体表达的影响,79页,Q969.91 S433.7
  6. 模式昆虫赤拟谷盗AChE的毒理学特性研究,77页,Q969.48 S433.5
  7. 3种书虱酯酶基因的克隆及其mRNA表达水平研究,189页,Q969.375
  8. 酰肼类昆虫生长调节剂的合成及生物活性研究,178页,Q966
  9. 桔小实蝇胚胎发育及生理生化的初步研究,55页,Q969.456.8
  10. 昆虫细胞--人生长激素表达系统的分子遗传学研究,41页,Q96
  11. 蟋蟀鸣声及其行为研究,84页,Q96
  12. 温度和营养对甜菜夜蛾生殖的影响,74页,Q96
  13. 茶翅蝽沟卵蜂的初步研究,56页,Q96
  14. 日本弓背蚁头部显微结构的研究,31页,Q96
  15. 昆虫激素与CTAB对杆状病毒复制和相关基因启动子活性的影响,111页,Q96
  16. 粘虫胚胎细胞系的建立及病毒对其侵染过程的研究,42页,Q96
  17. AVP(4-8)调控基因的新途径研究及大鼠CCTβ在昆虫细胞中的表达,75页,Q96
  18. 昆虫学科普及昆虫数字化博物馆的创建,107页,Q96 G268
  19. 东北地区中生代哈格鸣螽化石研究(直翅目:哈格鸣螽总科),68页,Q96 Q969.264.2 Q911.2
  20. 棉铃虫卵内半胱氨酸蛋白酶的分离纯化、氨基酸序列分析及cDNA文库的构建,45页,Q96 S433.4
中图分类: > Q962 > 生物科学 > 昆虫学 > 昆虫细胞学
其他分类: > Q78 > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)

© 2012 book.hzu.edu.cn