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类人胶原蛋白Ⅰ的分离纯化及其功能特性的研究

专 业: 生物化工
关键词: 类人胶原蛋白 分离纯化 工艺参数 功能特性 泡沫稳定性
分类号: Q512.6
形 态: 共 54 页 约 35,370 个字 约 1.692 M内容
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内容摘要


本文对类人胶原蛋白ⅠHCB Ⅰ的分离纯化及其功能特性进行了研究。

收集基因工程菌.Escherichia coli BL 21高密度发酵后的菌体,经高压匀浆破碎、沉淀、超滤、离子交换层析后,得到高纯度的目标蛋白。

在细胞破碎阶段,对高压匀浆过程中的物理和化学因素:

包括匀浆压力,匀浆次数,菌体浓度,悬浮体系做了系统研究。

确定工艺为:

菌体浓度15%,蒸馏水悬浮,在80MPa压力下连续高压匀浆两次,每次通过匀浆机的裂解液用冰浴冷却。

在沉淀阶段,采用L<,16>4<’5>正交表进行实验,确定沉淀的最佳参数为:

pH值2.8,NaCl浓度3%,温度18℃,蛋白浓度5g·L<’-1>。

在超滤阶段,采用截留分子量为30kD的超滤膜包对沉淀后的上清进行超滤,通过多次实验确定参数为:

进料浓度为0.2%,操作压力为0.3MPa,进料流量为3 L·min<’-1>,温度为25℃,pH值为3.在层析阶段,先用CM-1吸附杂蛋白,上样浓度为4mg·mL<’-1>,吸附时间为1h,缓冲液为pH值为6.5、浓度为20mmol·L<’-1>的磷酸盐缓冲液,内含0.03 mol·L<’-1>的NaCl;再用 Fracogel EMD DEAE吸附目标蛋白,上样浓度为4mg·mL<’-1>,缓冲液为pH8.0、50 mmol·L<’-1>的Tris-HCl溶液,以 3.0 mL·minL<’-1>的流速过柱吸附,采用逐次洗脱方法洗脱。

最终得到纯度为96.8%的类人胶原蛋白Ⅰ,回收率为80.47%。

经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳并以考马斯亮蓝G-250染色后得一单带。

测定了类人胶原蛋白Ⅰ的溶解性、吸水性、保水性、湿润性、吸油性、乳化性质及起泡性和泡沫稳定性,并与分子量相近的明胶的相关特性进行对比。

结果表明:

类人胶原蛋白I具有良好的溶解性、吸水性、湿润性、吸油性、乳化和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性及一定的保水性..……

全文目录


文摘
英文文摘
第一章 综述
1胶原蛋白
1.1胶原蛋白概述
1.2胶原蛋白的结构特点
1.3胶原蛋白的形态分类和生理机能
1.4胶原蛋白的应用
2类人胶原蛋白
2.1动物提取胶原蛋白的应用限制
2.2基因重组技术生产胶原蛋白的研究现状
2.3类人胶原蛋白的优势
3生物分离工程
3.1生物分离工程的特点和方法
3.2生物技术产物分离提纯的特点
3.3生物技术产物分离提纯的工艺
3.4生物技术下游过程设计的优化
4重组蛋白质的分离纯化
4.1基因工程产品和传统生化产品回收方法的比较
4.2重组蛋白质分离纯化的基础和方法
5本研究的目的及意义
第二章 实验材料、设备与测定方法
1实验材料
1.1主要试剂
1.2菌体
2主要仪器和设备
3测定方法
3.1总蛋白含量的测定
3.2类人胶原蛋白Ⅰ的检测
第三章 类人胶原蛋白Ⅰ的分离纯化
1发酵液的预处理
2细胞破碎
2.1细胞破碎方法的选择
2.2高压匀浆破碎工艺优化
3沉淀
3.1盐种类的选择
3.2正交实验
3.3沉淀工艺的确定
4超滤
4.1超滤参数的选择
4.2超滤工艺的确定
4.3膜的清洗及保存
5离子交换层析
6纯化结果
7储存
8结论
第四章 类人胶原蛋白Ⅰ功能特性的初步研究
1类人胶原蛋白Ⅰ产品质量规格
2类人胶原蛋白Ⅰ的功能特性
2.1溶解性
2.2吸水性
2.3保水性
2.4湿润性
2.5吸油性
2.6乳化性质
2.7起泡性和泡沫稳定性
3结论与展望
第五章 对后续工作的建议
参考文献

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中图分类: > Q512.6 > 生物科学 > 生物化学 > 蛋白质 > 单纯蛋白

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