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发光杆菌产生胶原酶及其应用于制备胶原蛋白的研究

专 业: 皮革化学与工程
关键词: 发光杆菌 发酵条件 胶原酶 胶原蛋白 制备
分类号: TS512
形 态: 共 70 页 约 45,850 个字 约 2.193 M内容
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内容摘要


该论文从一株对动物皮有降解能力的发光杆菌mbl15菌株出发,研究该菌的基本生理生化性质和产酶条件,优化了其培养基组成,并研究了该菌所产酶对胶原的降解条件,对所得胶原蛋白多肽的分子量和氨基酸进行了分析.对发光杆菌mbl15菌株形态观察和生理生化分析结果是:该菌短杆状,单个或形成短链,能运动,不产生芽孢;透射电子显微镜下观察,可以看到该菌株都有明显的鞭毛,菌长1-1.8 μ m,宽0.5-1 μ m;菌落呈圆形、整齐光滑、半透明;该菌可以水解淀粉,利用柠檬酸盐,但耐盐性比较差,可以利用多种糖发酵产酸,具有很好的传代稳定性.对发光杆菌mbl15菌株产胶原蛋白酶发酵条件的研究表明,其产胶原蛋白酶最佳培养条件为牛肉膏2﹪、蔗糖2﹪、酵母粉0.2﹪、CaCl<,2> 0.04﹪、K<,2>HPO<,4>·3H<,2>O 0.25﹪和NaH<,2>PO<,4>·2H<,2>O 0.05﹪;最佳碳源为蔗糖,氮源为牛肉膏,起始pH6.5,摇瓶装量10﹪,发酵温度37℃,接种浓度6﹪.对发光杆菌mbl15发酵液中胶原酶性质的研究表明,该菌所产胶原酶的最适反应温度为32℃、pH7.5,丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF几乎不影响粗酶液的酶活,金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA抑制该菌产胶原酶的活性.本论文以鲜猪皮为原料,采用发光杆菌mbl15所产胶原蛋白酶,研究了制备胶原蛋白多肽的反应条件.单因素正交试验确定的最佳反应条件是:pH7.5、液比2.5、反应时间6h、温度35℃、酶量3﹪.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸分析表明,制备出的胶原蛋白多肽的分布主要在6.6kD以下,含有18种氨基酸……

全文目录


1 前言
1.1 胶原酶
1.2 产胶原酶的主要微生物及相应胶原酶的性质
1.2.1 梭菌
1.2.2 弧菌
1.2.3 类菌体
1.3 胶原酶的应用
1.3.1 腰椎间盘突出症的治疗
1.3.2 预防和治疗瘢痕疙瘩
1.3.3 治疗杜普伊特伦病
1.3.4 在细胞分离上的应用
1.3.5 在食品工艺中的应用
1.4 胶原蛋白的制备研究进展
2 胶原酶产生菌株生理生化性质的研究
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.2.1 菌株
2.2.2 主要仪器和试剂
2.2.3 培养基
2.2.4 酶活测定方法
2.2.5 甘氨酸标准曲线的建立
2.2.6 发光杆菌mbl15生理生化性质测定
2.4 结果
2.4.1 甘氨酸标准曲线绘制
2.4.2 发光杆菌mbl15个体特征
2.4.3 菌落特征
2.4.4 生理生化特征
2.4.5 菌株传代稳定性
2.5 讨论
2.5.1 胶原酶产生菌
2.5.2 胶原酶活力的检测
3 胶原酶产生菌发酵条件及酶学性质的初步研究
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.2.1 菌种
3.2.2 培养基
3.2.3 主要仪器和试剂
3.2.4 胶原酶活力测定方法
3.2.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE
3.2.6 明胶活性聚丙烯酰胺凝胶电泳
3.3 结果
3.3.1 mbl15菌株发酵条件研究
3.3.2 mbl15菌株产胶原酶的粗酶性质
3.3.3 正交试验优化培养基组成
3.4 讨论
3.4.1 mbl15菌株发酵条件
3.4.2 mbl15菌株发酵酶液性质
4 发光杆菌mbl15胶原蛋白酶降解鲜猪皮的研究
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.2.1 发光杆菌mbl15发酵液
4.2.2 仪器与试剂
4.2.3 发光杆菌mbl15胶原酶的硫酸铵沉淀
4.2.4 mbl15粗酶液的制备
4.2.5 脂肪含量
4.2.6 灰分
4.2.7 胶原蛋白和肽的氨基酸组成分析
4.2.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE测定胶原蛋白分子量
4.2.9 蛋白质含量测定
4.2.10 胶原蛋白制备的反应条件
4.3 结果与讨论
4.3.1 猪皮中主要成分的分析
4.3.2 发光杆菌mbl15胶原蛋白粗酶的制备
4.3.3 胶原蛋白制备的单因素实验
4.3.4 胶原蛋白提取的正交试验
4.3.5 胶原蛋白分子量及氨基酸分析
4.4 小结:
5 结论
参考文献
声 明
致 谢

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中图分类: > TS512 > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 皮革工业 > 皮革学 > 生皮组织学

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