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红藻和蓝藻藻胆蛋白和藻胆体的体外组装特性及缺氮和恢复过程中藻胆体结构变化的动态过程研究

专 业: 微生物学
关键词: 蓝藻和红藻 钝顶螺旋藻和多管藻 藻胆蛋白和藻胆体 体外聚集 缺氮和恢复 褪绿
分类号: Q93
形 态: 共 102 页 约 66,810 个字 约 3.196 M内容
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内容摘要


从海洋大型红藻多管藻中分离纯化到R-藻红蛋白RPE.将多管藻在蒸馏水中自溶,然后离心,上清液用硫酸铵沉淀,5mM磷酸缓冲液透析,然后用DEAESepharose Fast Flow进行pH梯度洗脱,收集R-藻红蛋白洗脱峰,测定其光谱特性.分离得到的R-藻红蛋白的吸收光谱中有三个吸收峰,分别为565nm、539nm和498nm,用498nm激发,荧光发射峰为574nm,最高吸收峰565nm与蛋白的特征吸收峰280nm的比值A<,565>/A<,280>达到了5.6,Native-PAGE表明,只有一条蛋白带,说明分离得到的R-藻红蛋白是纯化的.从钝顶螺旋藻中分离纯化出C-藻蓝蛋白CPC和异藻蓝蛋白APC.将钝顶螺旋藻藻体浸入5mM的磷酸缓冲液,在-20℃冻融,15000g离心,硫酸铵沉淀,10mM磷酸缓冲液透析,然后用羟基磷灰石柱层析,20mM磷酸缓冲液pH7.0,0.1M NaCl洗脱,收集CPC,然后用100mM磷酸缓冲液pH7.0,0.1M NaCl洗脱,收集APC,然后,分别经P300柱层析,分离得到纯化的CPC和APC,光谱检测表明,CPC和APC的特征吸收峰分别为620nm和650nm,荧光发射峰分别位于650nm和665nm,A<,620>/A<,280>和A<,650>/A<,280>的比值分别达到4.03和3.91,Native-PAGE检测表明,没有其它杂蛋白.对三种藻胆蛋白在溶液中的分子与分子之间相互作用与聚集行为进行了研究.应用我们设计的简易方法制备了钝顶螺旋藻藻胆体张玉忠等,海洋科学,1997,6,39-42,用戊二醛进行固定,滴加于喷碳的铜网上,在铜网上吸附1min,然后用磷钨酸染色,TEM观察,结果表明,钝顶螺旋藻藻胆体在电镜铜网上吸附时,具有自组装特性,自组装形成的聚集体形状相似,类似雪花状,具有明显的分形特性,符合DLA分形模型.为了进一步研究钝顶螺旋藻藻胆体在体外的聚集特性,将钝顶螺旋藻藻胆体滴加于空气/水界面上,应用LB膜技术制备藻胆体LB膜.钝顶螺旋藻在缺氮培养和恢复培养过程中,色素物质的变化主要经历了以下过程:在缺氮初始阶段,藻胆体会快速降解,使得藻胆蛋白含量迅速减少,之后叶绿素a的含量也随之迅速减少.两种主要色素物质的减少使得藻液的颜色由蓝绿色变为绿色并逐渐变为黄色.加入氮源恢复培养后,藻胆蛋白和叶绿素a的含量会同时增加,藻体颜色也由黄色逐渐恢复正常的蓝绿色.缺氮时间越长,藻液颜色恢复至正常的蓝绿色所需的时间也越长……

全文目录


文摘
英文文摘
第一章 藻胆蛋白和藻胆体的结构、功能与进化
1.藻胆蛋白的结构、功能与进化
1.1藻胆蛋白的种类和组成
1.2藻胆蛋白的三维结构
1.3藻胆蛋白发色团与脱辅基蛋白的相互作用
1.4藻胆蛋白的进化
2.藻胆体的结构与功能
2.1藻胆体的结构类型
2.2藻胆体的结构与组成
3.3藻胆体的体外重组
3.缺氮对藻胆蛋白和藻胆体结构的影响及机理
4.结语
参考文献
第二章 扫描探针显微镜及其在生物学研究中的应用
1.扫描隧道显微镜的发明
2.扫描隧道显微镜工作原理、结构及扫描探针显微镜发展现状
3.扫描探针显微镜的特点、在生物学研究中的应用及前景
3.1扫描探针显微镜的特点
3.2 SPM在生物学研究中的应用
4.展望
参考文献
第三章 R-藻红蛋白、C-藻蓝蛋白、异藻蓝蛋白的体外聚集特性
1.材料和方法
1.1实验材料的采集和培养
1.2藻胆蛋白的分离和纯化
1.3聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE电泳
1.4藻胆蛋白的紫外光谱与荧光光谱
1.5藻胆蛋白的冰冻蚀刻、碳\铅复形的制备及电镜观察
1.6 R-藻红蛋白在HOPG表面的吸附
1.7 R-藻红蛋白LB膜的制备
1.8STM观察
2.结果与分析
2.1多管藻Polysiphonia urceolataR-藻红蛋白的分离纯化
2.2钝顶螺旋藻Spirulina platensisC-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的分离纯化
2.3藻胆蛋白分子在溶液中聚集特性的冰冻/蚀刻与电镜观察
2.4 R-藻红蛋白晶体晶面上的分子聚集方式的STM观察
3.讨论
参考文献
第四章 钝顶螺旋藻SPirulina platensis藻胆体体外聚集特性
1.材料和方法
1.1钝顶螺旋藻完整藻胆体的分离制备
1.2藻胆体结构及分形现象的透射电子显微镜观察
1.3藻胆体LB膜的制备
1.4藻胆体LB膜结构的STM观察
2.结果与分析
2.1钝项螺旋藻完整藻胆体的光谱特性
2.2钝顶螺旋藻藻胆体结构及分形现象的透射电子显微镜观察
2.3钝顶螺旋藻藻胆体LB膜的成膜性能
2.4钝顶螺旋藻藻胆体LB膜结构的STM观察
3.讨论
参考文献
第五章 钝顶螺旋藻缺氮及恢复过程中藻胆体结构变化的动态过程
1.材料与方法
1.1实验材料
1.2螺旋藻的培养方法
1.3缺氮培养
1.4藻体藻胆蛋白及叶绿素含量的测定
1.5菌体形态变化的观察
1.6螺旋藻细胞超薄切片的固定方法
2.结果与分析
2.1钝顶螺旋藻在缺氮培养及恢复培养过程中的细胞形态及色素物质含量的动态变化
2.2钝顶螺旋藻在缺氮培养及恢复培养过程中细胞超微结构的动态变化
3.讨论
参考文献
结论

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