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重组质粒pEGFP-BDNF的构建及其真核表达的实验研究

专 业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 脑源性神经营养因子 基因治疗 增强型绿色荧光蛋白 质粒
分类号: R76
形 态: 共 52 页 约 34,060 个字 约 1.629 M内容
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内容摘要


目的:克隆人脑源性神经营养因子human brain-derived neurotrophic factor,hBDNF的编码框,构建携带BDNF基因的重组质粒pEGFP-BDNF。

为进一步基因治疗感音神经性聋奠定基础。

方法:1克隆人BDNF cDNA:选用培养符合标准的Hale细胞,利用Trizol试剂提取总RNA;RT-PCR扩增人BDNF cDNA片段;克隆到pMD18-T Vector载体。

2pEGFP-BDNF的构建和鉴定:分别在上下游引物中引入XhoI,BAMHI酶切位点,再次克隆到pMD18-T中,转化大肠杆菌,筛选阳性重组子。

BDNF与pEGFP-N2载体经XhoI,BAMH I双酶切,T4 DNA连接酶连接,DNA测序鉴定插入片段与开放读码框的正确性。

3细胞转染:利用脂质体法将重组质粒pEGFP-BDNF转染Hale细胞。

4检测融合蛋白pEGFP-BDNF的表达:利用荧光显微镜观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测转染细胞中BDNF的表达。

结果:克隆人BDNF cDNA,成功构建了重组质粒pEGFP-BDNF,转染Hale细胞4..……

全文目录


英文缩略词表
一.中文摘要
二.英文摘要
三.引言
四.材料与方法
五.结果
六.讨论
七.结论
八.参考文献
九.综述

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中图分类: > R76 > 医药、卫生 > 耳鼻咽喉科学

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