优秀研究生学位论文题录展示

稻瘟病菌致病缺陷突变体Ly-130的获得及标记基因MgPRG1功能的初步研究

专 业: 植物病理学
关键词: 稻瘟病菌 T-DNA插入 致病缺陷突变体 hiTAIL-PCR MgPRG1 互补
分类号: S4
形 态: 共 66 页 约 43,230 个字 约 2.068 M内容
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内容摘要


稻瘟病是水稻生产上的重要病害之一,病原菌为Magnaporthe grisea.研究致病相关基因、深入了解致病分子机理对于防治稻瘟病有着重要意义.本文利用农杆菌介导的ATMT转化技术成功获得一个致病缺陷突变体Ly-130,从中鉴定了T-DNA插入标记的基因MgPRG1,进而通过互补验证对MgPRG1的生物学功能做了初步分析并对该基因进行了表达及定位分析。

致病缺陷突变体Ly-130的获得T-DNA插入突变是鉴定植物病原真菌致病相关基因的有效途径之一.我们利用农杆菌介导转化法ATMT筛选出一个对大麦和水稻都完全失去致病性的稻瘟病菌突变体Ly-130。

Ly-130产孢显著下降,在正常的疏水表面不能形成附着胞,菌落生长速率明显减慢,菌落颜色比野生型Guy11菌株的浅,有性生殖不能形成子囊壳。

MgPRG1基因的分离采用hiTAIL-PCR的方法,扩增了T-DNA右边界的852bp基因组DNA序列并克隆到pGEM-Teasy载体上.测序和BLAST分析结果显示,外源T-DNA插入了稻瘟病菌的MGG_14008.5基因内,该基因位于第v染色体上,由1617个碱基组成,有4个外显子和3个内含子,T-D..……

全文目录


摘要
目录
第一章 文献综述
1.稻瘟病概述
1.1 稻瘟病及病原菌
1.2 稻瘟病的发病规律
1.3 稻瘟病菌的侵染过程
2.稻瘟菌致病相关基因的研究进展
2.1 产孢相关基因
2.2 附着孢发育相关基因
2.2.1 界面硬度和疏水性影响附着胞的分化
2.2.2 分生孢子分泌疏水蛋白识别胞外信号
2.2.3 细胞质膜跨膜蛋白识别和传递胞外信号至胞内
2.2.4 附着胞黑色素层的沉积为巨大膨压的形成提供前提
2.2.5 分生孢子特异性内含物降解为膨压提供物质基础
2.2.6 附着胞细胞骨架重建和侵入栓的形成为附着胞侵入指明方向
2.3 与致病相关的胞内信号传导途径
2.3.1 cAMP途径
2.3.2 G蛋白途径
2.3.3 MAP kinase途径
2.3.4 Ca~2+离子途径
3.农杆菌介导的稻瘟病菌T-DNA转化和插入突变研究
3.1 丝状真菌遗传转化的研究进展
3.2 农杆菌介导的T-DNA转化研究
3.3 T-DNA插入突变的优势分析
4.扩增侧翼序列技术的研究
4.1 反向PCRInverse PCR,IPCR
4.2 TAIL-PCRThermal Asmmetric Interlaced PCR
4.3 外源接头PCR
5.本研究的目的意义
第二章 材料与方法
1.材料
1.1 实验菌株、质粒载体及水稻、大麦致病性测定品种
1.1.1 实验菌株
1.1.2 质粒载体
1.1.3 水稻、大麦致病性测定品种
1.2 各类培养基、抗生素及工具酶
1.2.1 培养基
1.2.2 各类抗生素
1.2.3 工具酶
1.3 各类生化试剂、溶液及试剂盒
2 稻瘟病菌生物学性状测定试验
2.1 菌落生长速度及菌落特性
2.2 稻瘟病菌产孢培养和产孢量
2.3 附着胞形成实验
2.4 稻瘟菌有性生殖实验
2.5 稻瘟菌单孢分离实验
2.6 大麦和水稻离体接种
2.7 洋葱表皮穿透实验
2.8 稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着孢的GFP观察
3 各类PCR反应
3.1 常规PCR反应体系
3.2 细菌菌落PCR反应体系
3.3 高效TAIL-PCRhiTAIL-PCR反应体系及反应程序
4.质粒DNA、基因组DNA及小片段DNA相关操作
4.1 质粒DNA提取CTAB法
4.2 基因组DNA抽提
4.3 DNA酶切
4.4 胶回收Axyprep DNA gel extraction kit回收法
4.5 酶切DNA片段的去磷酸化60μl反应体系
4.6 连接反应
5.细菌和真菌转化
5.1 农杆菌AGL-1电感受态制备及PATMT1质粒电转化
5.2 农杆菌介导的T-DNA转化
5.3 大肠杆菌感受态细胞制备及细菌转化
5.4 稻瘟菌原生质体制备与转化
第三章 结果与分析
1.致病缺陷突变体Ly-130的获得
1.1 农杆菌介导的稻瘟菌T-DNA转化
1.2 转化子致病性筛选和突变体Ly-130的获得
1.3 突变体Ly-130遗传稳定性检测
2.MgPRG1基因的分离与同源性分析
2.1 MgPRG1基因的分离
2.2 MgPRG1基因的克隆、测序
2.3 MgPRG1基因的获得与序列分析
2.4 MgPRG1基因同源性分析
3.突变体Ly-130性状互补转化
3.1 互补载体的构建
3.2 互补转化
4 MgPRG1基因功能初步分析
4.1 致病性分析
4.2 菌落形态和生长速度分析
4.3 分生孢子和附着孢形成观察
4.4 有性生殖实验
4.5 MgPRG1基因表达和定位分析
第四章 全文总结及后续研究
1.全文总结
2.存在的问题和后续的研究
参考文献
附表

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中图分类: > S4 > 农业科学 > 植物保护

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